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磁性介孔氧化硅纳米颗粒载带短链核酸和蛋白药物及其生物医学应用-生物医学工程专业论文 word格式
上海交通大学学位论文原创性声明本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进 行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含 任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重 要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声 明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名:日期:年月日上海交通大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定, 同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版, 允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的 全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫 描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于保密 □,在 年解密后适用本授权书。不保密 □。(请在以上方框内打“√ ”)学位论文作者签名:指导教师签名:日期:年月日日期:年月日磁 性介孔氧化硅纳米颗粒 载带短链核酸和蛋白 药物 及其生物医学应用 摘要介孔氧化硅纳米颗粒由于具有极大的比表面积、孔容,可调的介孔孔 径和易被修饰的表面特性,在药物转运系统研究中越来越受到人们的关注, 其中针对小分子抗炎药物或化疗药物的载带得到了快速发展,但是针对生 物分子药物的装载与传输研究则显得较为滞后。本工作选取了三类具有代表性的短链核酸和蛋白生物分子,利用三种 不同孔径大小(2.7 nm,4.3 nm,6.1 nm)的磁性介孔二氧化硅纳米颗粒(M-MSNs),分别实现了对短链 siRNA (~20 bp),单链 DNA(CpG 寡核苷酸, ~20 nt)和蛋白药物(尿激酶,简称 UK, ~50 kD)的载带并扩展了 其复合体在肿瘤基因沉默治疗,肿瘤免疫治疗和靶向溶栓领域的应用。相 对于传统脂质体试剂载带核酸(具有脂质体毒性大,颗粒尺寸分布范围广 等缺陷)和尿激酶静脉注射治疗血管栓塞(具有药物剂量大,溶血等副作 用缺陷)的方案,M-MSNs 纳米药物复合体更有望被用于体内的治疗研究。第二章中,我们主要整理了整个论文所涉及的三种孔径的 M-MSNs 的 材料特性。首先,我们制备了三种孔径的磁性介孔二氧化硅纳米颗粒,并 研究了其形貌特征,孔径分布,磁化曲线等特性。还研究了 2.7 nm 孔径的 M-MSNs 经 siRNA 载带并经聚乙烯亚胺(PEI)包被形成的复合体的形貌特 征和粒径分布。另外,经氨基修饰或进一步聚乙二醇(PEG)修饰孔径为 4.3 nm 的 M-MSNs 的形貌,Zeta 电位和粒径分布也被进行了表征。第三章中,我们在具有较强疏水性的溶液环境中实现了 M-MSNs 的介 孔孔道对 siRNA 的装载,并在装载 siRNA 后的 M-MSNs 表面包覆阳离子型 高分子聚乙烯亚胺(PEI),于是构建了基于 M-MSNs 的 siRNA 转运载体(M-MSN_siRNA@PEI)。后续实验证明,M-MSN_siRNA@PEI 的干扰效第 I页率具有很强的溶酶体逃逸动力学依赖性,于是我们发掘了该系统在 RNAi作用发挥中所遇到的瓶颈,即大量 siRNA 会被束缚于细胞中的内涵-溶酶体 内,从而无法参与细胞质中诱导基因沉默的过程。最后,我们对 M-MSN_siRNA@PEI 转运载体进行了表面功能化处理——连接 KALA 多肽, 这种修饰提高了转运载体的溶酶体逃逸能力,并因此显著增强了其诱导细 胞内源基因的 RNA 干扰效率。第四章中,我们合成了氨基(APTES)修饰的带正电荷的 M-MSNs,简称 M-MSN-A,为了使其应对更复杂的体内环境,我们将其进一步修饰聚乙二 醇高分子(PEGylation)所得到的颗粒简称为 M-MSN-P。然后,我们研究 了 M-MSN-A 和 M-MSN-P 两颗粒对 CpG 吸附和释放的规律,以及两者携 带 CpG 后对巨噬细胞 RAW264.7 内吞的影响,并对内吞现象从颗粒降解和 颗粒内吞方面做出解释。我们还进一步检验了该载体系统与肿瘤化疗药物 共同杀伤肿瘤细胞的效果。最后,我们研究了该载体系统在小鼠体内刺激 免疫反应的能力,与体外实验结果进行分析比对,并为后续肿瘤模型小鼠 的治疗研究提供数据支持。第五章中,我们根据高分子药物扩散定律(菲克定律),建立了平板溶 栓数学理论模型,得出可被用来极其方便地检测酶活性的参数。我们还利 用不同活性药物(尿激酶,UK)检验此模型的实用性。接下来,我们研究 了溶栓药物与 M-MSNs 之间的吸附和脱附规律,通过参阅文献,我们发现 我们材料的吸附和脱附曲线跟文献中理论公式具有很高的贴合度。为了检 验该载体系统的在体内的靶向溶栓效果,我们建立了流体栓塞模型来进行 模拟,发现了 M-MSNs/UK 复合物相对于游离 UK 药物,显著提高了溶栓 效率(3.
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