雌性牙鲆性激素合成酶相关基因snp和dna甲基化与繁殖内分泌相关性研究-水生生物学专业论文 word格式.docxVIP

中英文缩略词表DNMTs甲基转移酶（methyltransferase）E217β-雌二醇（17β-Estradiol）HPG丘脑-垂体-性腺轴（Hypothalamus-Pituitary-Gonadal axis）MBDs甲基化CpG域结合蛋白（methyl-CpG-bindingdomain,MBDs）ng纳克（nanogram）pg微微克（皮克）（Picogran）RFLP限制性内切酶片段长度多态性（Restriction FragmentLengthPolymorphism）RIA放射免疫测定方法（Radioimmunoassay）SNP单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism）SSR简单重复序列（Simple SequenceRepeat）T睾酮（Testosterone）TSD 温度依赖型性别决定（temperature-dependent sexdetermination）17α, 20β-DHP17α,20β-二羟黄体酮（17α,20β-Dihydroxy-4-pregnen-3-one）3β–HSD 3β-羟类固醇脱氢酶（5-3β-hydroxy-steroid dehydrogenase）雌性牙鲆性激素合成酶相关基因SNP 和DNA 甲基化与繁殖内分泌相关性研究摘要本文以人工要养殖雌性牙鲆（Paralichthysolivaceus）为研究对象，首次分析了cyp-17Ⅱ基因甲基化位点的突变对其基因表达和繁殖内分泌的影响机理；并对cyp17-Ⅱ、Cyp19、Foxl2基因启动子和编码区CpG富集区（CpG richregion）在性腺发育期的甲基化模式对基因表达和繁殖性状的影响进行了研究和分析。1cyp-17Ⅱ基因甲基化位点的突变对其基因表达和繁殖内分泌的影响机理细胞色素P450c17-Ⅱ（cyp17-Ⅱ）是影响鱼类生长，性腺分化和发育等繁殖性状的重要因子。牙鲆cyp17-Ⅱ基因编码区有三个CpG富集区。本文的目的是研究cyp17-Ⅱ外显子的突变是否发生在CpG位点上，以及这些CpG位点的突变和甲基化水平是否参与调控牙鲆cyp17-Ⅱ基因表达和繁殖内分泌。结果显示：检测到三个单核苷酸多态性，分别是：SNP1：[(c. G594A（p.Gly188Arg）] 在外显子4 上，称为L1位点（L1 locus）；SNP2（c.A939G）和SNP3（c.C975T），位于cyp17-Ⅱ基因外显子6的CpG富集区，称为L2位点（L2locus）。此外，在939bp位置A→C的转变使cyp17-Ⅱ编码区增加了一个新的甲基化位点。通过多重比较分析，两个位点（L1locus和L2locus）都与卵巢中睾酮（T）水平（P0.05）和cyp17-Ⅱ表达（P0.01）显著相关。有趣的是，GG型个体在L2 位点包含8个CpG甲基化位点与包含7个甲基化位点的AA型的个体相比，具有较低的睾酮水平和cyp17-ⅡmRNA表达含量。而且，GG型个体在938bp位置高度甲基化（≥77.8%）。这些暗示cyp17-Ⅱ编码区突变和甲基化水平可能影响雌性牙鲆基因表达和繁殖内分泌水平，并且，L2 位点可以作为牙鲆育种的一个候选基因或遗传标记。2牙鲆卵巢发育期内cyp17-Ⅱ的甲基化水平与基因表达水平及繁殖性状相关性分析I在鱼类中细胞色素P450c17-Ⅱ（cyp17-Ⅱ,17α-羟化酶）参与卵泡成熟过程中类固醇激素的产生。繁殖周期中cyp17-Ⅱ基因的相对表达模式将有助于阐释其在性腺发育中的功能。此外，表观遗传修饰特别是DNA 甲基化对基因表达调控起重要作用。本实验以成年雌性牙鲆为研究对象，采用荧光实时定量测定牙鲆性腺cyp17-Ⅱ基因的相对表达量，并检测性腺指数（GSI）、雌二醇、睾酮等繁殖生理指标。运用亚硫酸测序法测定位于编码区外显子4和6上的CpG二核苷酸甲基化水平。在性腺发育早期，cyp17-Ⅱ基因具有较低的表达水平，但最后升高。同时，睾酮和雌二醇的变化趋势与cyp17-Ⅱ基因表达趋势相一致。相反，性腺中cyp17-Ⅱ基因在每个CpG富集区整体甲基化水平从Ⅱ期到Ⅳ下降，然后升高，其变化趋势与性腺中基因表达、睾酮和雌二醇以及GSI相反。基于本研究，提出cyp17-Ⅱ可能调节雄激素和雌激素水平，从而促进卵母细胞生长与成熟，并且cyp17-Ⅱ基因的转录调控可能受编码区CpG富集区甲基化水平的影响。这些结果将有利于研究鱼类繁殖内分泌的分子调控机制。3牙鲆卵巢发育期内cyp19、Foxl2基因的甲基化水平与基因表达水平及繁殖性状相关性分析本实验研究了性腺中对雌激素合成具有重要作用，并存在上下游调控关系的Foxl2 基因和Cyp19a 基因