缺血后处理启动细胞周期促进受损心肌组织修复的研究-生物化学与分子生物学专业论文 word格式.docxVIP

文略缩词表略缩词英文全称中文名称SDSpragueDawleySD 大鼠IPOIschemicPostconditioning缺血后处理LADLeftanteriordescendingcoronaryartery冠状动脉左前降支H3PPhosph-histoneH3磷酸化组蛋白H3α-SMAα-sarcomericactin横纹肌肌动蛋白CDKCyclinDependentKinase细胞周期依赖蛋白激酶SDSSodiumdodecylsulfate十二烷基硫酸钠HRPHorseradishperoxidese辣根过氧化物酶IHCImmunohistochemistry免疫组化IFImmunofluorescence免疫荧光WBWesternBlot蛋白印迹RT-PCRReverse Transcriotion-Polymerase ChainReaction逆转录-聚合酶链式反应IPCIschemicPreconditioning缺血预处理I/RIschemia/Reperfusion缺血再灌注IRIIschemiaReperfusionInjury缺血再灌注损伤APSAmmonium Persulfate过硫酸铵TEMEDN,N,N’,N’-tetramethyl-ethylenediamineN,N,N’,N’-四甲基乙二胺PAGEPolyacrylamidegeleletrophoresis聚丙烯酰胺凝胶电泳SABCStreptAvidin-BiotinComplex链霉亲和素-生物素复合物DAPI4’,6-diamidino-2-phenylindole4’,6-二脒基-2-苯基吲哚Cyclin细胞周期蛋白LVSPLeft ventricularsystolicpressure左室收缩压LVEDPLeftventricular end-diastolicpressure左室舒张末期压+dp/dtmax－dp/dtmaxMaximalrateofriseofleft-ventricularpressureMaximalrateofdeclineofleft-ventricularpressure左室等容期上升最大速率左室等容期下降最大速率缺血后处理启动细胞周期促进受损心肌组织修复的研究中文摘要目的：缺血后处理(IschemiaPostconditioning,IPO)作为一种内源性保护机制，已经证明可以有效抑制心肌细胞的凋亡，但是否还可以通过诱导细胞增殖，修复受损的心肌组织尚不清楚。本研究通过建立大鼠缺血后处理模型，观察细胞增殖指标Ki67、H3P和细胞周期蛋白cyclins和CDKs的变化，研究IPO能否通过启动细胞周期，诱导心肌细胞的增殖，进而补偿受损心肌组织。方法：1、模型的建立。健康成年雄性8周龄(220±25g)SD大鼠，随机分为3组：假手术组(Shamoperation, Sham)、缺血再灌注组(Ischemia/Reperfusion,I/R)、缺血后处理组(IschemicPostconditioning,IPO)。分别于术后1天、3天、7天和14天检测相关指标。2、血流动力学指标的测定。分别记录术后各时间点血流动力学指标：左室舒张末期压(LVEDP)、左室收缩压(LVSP)、左室等容期上升最大速率(+dp/dtmax)和左室等容期下降最大速率(-dp/dtmax)。3、心肌组织细胞增殖指标Ki67和H3P的检测。分别采用免疫组化SABC法和免疫荧光双标染色法检测术后各时间点Ki67和H3P的表达情况，并随机选取十个视野进行阳性单位和阳性细胞数的统计。4、心肌组织细胞周期cyclins和CDKs的检测。(1)mRNA水平运用RT-PCR法检测术后各时间点细胞周期蛋白(cyclinA、B、D、E)和细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK1、2、4、6)的表达，并进行灰度比值分析；(2) 蛋白水平运用WesternBlot法检测术后各时间点cyclinA2和cyclinB的表达水平，并进行灰度比值分析；(3) 组织水平运用免疫组化SABC 法和免疫荧光双标染色法检测术后各时间点cyclinA2和cyclinB的表达，并随机选取十个视野进行阳性单位和阳性细胞数的统计。结果：1、模型的建立。缺血过程中ST段抬高，表明缺血成功；当血液恢复再灌，ST段恢复至正常。2、血流动力学指标的变化。术后各时间点IPO、I/R 组LVSP、+dp/dtmax、-dp/dtmax均明显低于Sham组(P0.05)，同时LVEDP明显高于Sham组(P0.05)。与I/R组比较，IPO干预后各时间点LVSP及±dp/dtmax均升高(P0.05)，而LVEDP有下降趋势。3、心肌细胞增殖指标Ki67和H3P的检测结果。(1)免疫组