12 第十二篇章 基因诊断.pptVIP

例：PCR产物定量 PCR及其衍生技术 8. 靶核酸的定量分析 （2）极限稀释法 基本依据：PCR扩增的有效起始模板分子数 为104～106个 （二）PCR技术是基因诊断的一种基础技术 PCR及其衍生技术 8. 靶核酸的定量分析 （3）非竞争性对照法 基本依据：同时扩增靶序列和内标序列（扩增 效率相似） 如看家基因（house keeper) 用于RT-PCR进行表达分析 （二）PCR技术是基因诊断的一种基础技术 PCR及其衍生技术 8. 靶核酸的定量分析 （4）竞争抑制法 需制备标准参照核酸 （二）PCR技术是基因诊断的一种基础技术 PCR及其衍生技术 8. 靶核酸的定量分析 （5）荧光标记探针法 分析：安全、简便快捷、多重检测 荧光定量PCR 实时 (real time)PCR Hybridization and PCR are basic techniques used in gene diagnosis （三）DNA序列测定是最直接、最准确的基 因诊断技术 第一节 基因诊断的概念及常用技术 例：四色荧光自动测序分析结果 病例SOX9基因HMG box内发生单碱基置换突变R178L(G→T)，如图2所示，左侧正常对照第225位碱基为C，而该患儿为A（反义链中） 例：序列分析用于基因诊断研究 Hybridization and PCR are basic techniques used in gene diagnosis （四）DNA芯片技术是应用前景广阔的基因诊断技术（DNA chips) 第一节 基因诊断的概念及常用技术 生物芯片（biochip bioarray)技术： 根据生物分子间特异性相互作用，将生化分析过程集成于芯片表面，从而实现对DNA、RNA、多肽、蛋白质等各种生物成分的高通量快速检测分析。 疾病诊断芯片 个性化用药芯片 例：基因芯片杂交结果 二. 基因诊断有其独特的优点 第一节 基因诊断的概念及常用技术 高特异性：诊断目标 高灵敏度：分子生物学方法 结果稳定可靠：核酸的化学本质 早期诊断性：分子遗传学规律 应用广泛性：疾病与非疾病检查 第二节 基因诊断策略 在分子发病机制水平上对不同疾病的区分 诊断策略各不相同 第二节 基因诊断策略 不同的基因诊断策略 致病基因检测 连锁遗传标志检测 基因表达定量分析 表型相关的系列基因克隆 Commonly used Techniques Southern印迹杂交 限制性酶谱分析 限制性片段长度多态性分析 寡核苷酸探针杂交 PCR及其衍生技术 DNA芯片技术 第三节 基因诊断的应用前景 第三节 基因诊断的应用前景 1.杂交基础上的RFLP分析 2.PCR及其衍生技术 3.芯片阵列杂交 基因诊断的发展历史 第三节 基因诊断的应用前景 1.理论 2.技术 3.伦理 基因诊断的问题 第三节 基因诊断的应用前景 However, gene diagnosis is promising in development 基因诊断技术途径： ①直接分析致病基因分子结构及表达是否异常的直接诊断途径； ②利用多态性遗传标志与致病基因进行连锁分析的间接诊断途径。 第四节 遗传病的基因诊断 第四节 遗传病的基因诊断 直接诊断：检测已知致病基因 必要条件 ①被检基因的突变类型与疾病发病有直接的因果关系： ②被检基因的正常分子结构已被确定； ③被检基因突变位点固定而且已知。 1.点突变： （1）导致特异性限制性内切酶位点改变 直接诊断：检测已知致病基因 镰状红细胞贫血HBS-Beta株蛋白基因突变： PCR-RE分析 MstII CCTGAGG-CCTGTGG Beta株蛋白生成障碍性贫血-Beta株蛋白基因突变： PCR-RE分析 MaeI CAAG-CT