8蛋白质的分离纯化及鉴定技术知识-生化分析.pptVIP

第八章 蛋白质的分离纯化及鉴定技术;蛋白质相对分子质量常用研究方法：;1. 根据化学组成测定最低相对分子质量 ;2. 渗透压法测定相对分子质量;3. 沉降分析法（离心）;只要测得几种蛋白质相对分子质量标准物的Ve，并以它们的相对分子质量的对数(logMr)对Ve作图得一直线，再测出待测样品的Ve，即可从图中确定它的相对分子质量。;如果在聚丙烯酰胺凝胶系统中加入阴离子去污剂十二烷基硫酸钠(SDS) ，则蛋白质分子的电泳迁移率主要取决于它的相对分子质量，而与原来所带的电荷和分子形状无关。 ;电泳迁移率与多肽链分子量的对数有下列关系： log Mr = a—bμR;1. 前处理 (pretreatment) ;植物组织和细胞，由于具有细胞壁，一般需要用与石英砂或玻璃粉和适当的提取液一起研磨的方法破碎，液氮破碎或用纤维素酶处理也能达到目的。 细菌细胞的破碎的常用方法有超声波震荡，与砂研磨、高压挤压或溶菌酶处理(分解肽聚糖)等。 （3）提取：组织和细胞破碎以后，选择适当的缓冲液把所要的蛋白质提取出来。细胞碎片等不溶物用离心或过滤等方法除去。;如果所要的蛋白质主要集中在某一细胞组分，如细胞核、染色体、核糖体或可溶性的细胞质等，则可利用差速离心方法将它们分开。;2 粗分级分离 (rough fractionation) ;3 细分级分离 (fine