第章 免疫分析.pptVIP

第三章 免疫分析;第一节 免疫分析理论知识;酶免疫分析;区别;化学发光免疫的历史;化学发光免疫分析包括两部分： 1、免疫反应系统 2、化学发光系统 ;免疫反应系统，其基本原理同酶联免疫技术（ELISA），常采用双抗体夹心法、竞争法、间接法等反应模式。;化学发光系统的原理; 光照发光：是指发光剂（荧光素）经短波长的入射光照射后，电子吸收能量跃迁到激发态，在其回复至基态时，发射出较长波长的可见光（荧光）。; 化学发光：是指伴随化学反应过程所产生的光的发射现象。 某些物质(发光剂)在化学反应时，吸收了反应过程中所产生的化学能，使反应的产物分子或反应的中间态分子中的电子跃迁到激发态，当电子从激发态回复到基态时，以发射光子的形式释放出能量，这一现象称为化学发光。 ;（1）与放免（RIA）比较 化学发光避免了放射性核素的污染以及对操作人员的伤害，大大缩短了反应时间，同时兼具高灵敏度的优势。 （2）与酶免（ELISA）比较 灵敏度与可测范围远远高于酶免产品，兼具ELISA法简便的操作方法与较短的反应时间。;第二节 仪器检测原理; 电化学发光免疫分析（ECLIA）是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应，它包括电化学和化学发光两个过程。电化学发光免疫分析仪是采用电化学发光技术，生物素放大技术，以顺磁性微粒为固相载体，用三联吡啶钌标记抗原或抗体，三丙胺(TPA)为电子供体，而设计的一种自动化分析仪器。电化学发光稳定、持续时间长，易于控制并可根据待测分子的大小设计成多种反应模式如夹心法、竞争法等。 ;仪器测定技术要点 ;ROCHE公司电化学发光免疫分析仪;电化学发光剂反应原理 ;磁性微粒直径2.8μm，表面的凸凹使包被面积放大。磁性微粒体积小，悬浮于反应体系中，形成均一稳定的液相，在磁场中易于分离。;在电化学发光免疫分析系统中，磁性微粒为固相载体包被抗体(抗原)，用三联吡啶钌标记抗体(抗原)，在反应体系内待测标本与相应的抗原 (抗体)发生免疫反应后，形成磁性微粒包被抗体-待测抗原-三联吡啶钌标记抗体复合物，这时将上述复合物吸入流动室，同时引人TPA缓冲液。当磁性微粒流经电极表面时，被安装在电极下面的电磁铁吸引住，而未结合的标记抗体和标本被缓冲液冲走。与此同时电极加压，启动电化学发光反应，使三联吡啶钌和TPA在电极表面进行电子转移，产生电化学发光，光的强度与待测抗原的浓度成正比。;标记磁颗粒在电场中发光工作示意图;电化学发光免疫测定工作示意图;二、ABBOTT公司免疫分析仪;1、微粒子酶免分析法（MEIA）;4-甲基伞型酮磷酸盐（4-MUP）反应原理示意图 ;仪器测定技术要点 ;碱性磷酸酶标记的微粒子荧光免疫测定示意图;2、荧光偏振免疫分析法;荧光偏振免疫测定(FPIA)，为一种均相荧光免疫测定方法，其利用荧光物质在溶液中被单一平面的偏振光照射后，可吸收光能而产生另一单一平面的偏振发射荧光，该荧光强度与荧光标记物质在溶液中旋转的速度与分子大小呈反比，常采用抗原-抗体竞争反应原理，适用于小分子半抗原（如药物浓度）的检测。;　当光线通过偏振滤光片后，形成只有一个方向的电滋波，称之为偏振光。荧光物质经单一平面的偏振光（蓝色光，485nm）激发后，可吸收光能跃入激发态，在其恢复至基态时，释放能量并发射出单一平面的偏振荧光（绿色光，525nm～550nm） 。偏振荧光强度与荧光物质分子在液相中转动的速度呈反比，即分子大转动速度慢，荧光强度大，分子小转动速度快，荧光强度小。 ;反应系统内除待测抗原外，同时加入一定量用荧光素标记的小分子抗原，使二者与有限量的特异性大分子抗体竞争结合。 当待测抗原浓度高时，经过竞争反应，大部分抗体被其结合，而荧光素标记的抗原多呈游离的小分子状态。由于其分子小，在液相中转动速度较快，测量到的荧光偏振程度也较低。 反之，如果待测抗原浓度低时，大部分荧光素标记抗原与抗体结合，形成大分子的抗原抗体复合物，此时检测到的荧光偏振程度也较高。荧光偏振程度与待测抗原浓度呈反比关系。 我们测定待测抗原标准品后制标准曲线。通过检测反应系中偏振光的大小，从标准曲线上就可以精确地得知样品中待测抗原的相应含量。;偏振光和偏振荧光发生示意图;　1. 抗原抗体反应 　2.偏振荧光强度测定 ;第三节 免疫分析临床应用;1、肿瘤标志物 定义：由肿瘤组织产生的存在于肿瘤组织本身，或分泌至血液或其它体液，或因肿瘤组织刺激，由宿主细胞产生而含量明显高于正常参考值的一类物质。;一、肿瘤标志物;AFP简介;CEA简介;2、糖类抗原标志物 该类物质是肿瘤细胞表面的抗原物质，或肿瘤细胞所分泌的物质。 （1）糖类高分子黏蛋白抗原。CA125、CA15-3。 （2）血型类抗原。CA19-9、CA50;3、酶类标志物 肿瘤状态时，机体的酶活力就会发生较大变化。