发光细菌的分离与鉴别.pptVIP

发光细菌 发光细菌，进行生物发光的细菌。多数为海生，与发光浮游生物同是引起海面发光的原因。此外，在空气中，死鱼及水产加工食品的表面于暗处也会发光，如果我们吃了带有发光菌的食品后通过仪器观察我们这会发光。 下面请大家观看一些有关图片 有关图片 实验目的 做培养基培养发光细菌 从海洋鱼或海水中分离并鉴定发光细菌 实验原理 在深海生活的鱼类、虾类体表和内脏中有一种发光细菌，在黑暗中就会看到鱼或海水会发光 海水中的发光细菌稀散而且微小，为了分离更多的菌通常用硝基纤维薄膜过滤海水富集的细菌，然后将滤膜直接放在培养基上培养 由于过滤的薄膜上还有其他的菌，所以要将培养皿置于室温的条件下培养14~16h,在暗室观察是否有绿色亮点。若有在无菌操作条件下，用接种针取亮点处少量菌在培养基中分区划线纯化菌种，直至出现亮点单菌落。 实验器材和材料 培养皿、培养箱、酒精灯、接种针、高压灭菌锅、海水、硝基纤维滤膜 牛肉膏、蛋白胨、甘油、氧化钠、碳酸钠、琼脂、PH 7.0~7.5 实验步骤 培养基配方 牛肉膏1%、蛋白胨2%、琼脂2%、甘油1%、氯化钠3%、碳酸钙0.5%、PH 7.0~7.5 ? 制作无菌培养皿 将准备好的培养皿置于160℃干热灭菌4~6h或高压灭菌锅121℃灭菌30min。 ? 培养菌种 取300~500ml海水，通过与培养皿大小相等的硝基纤维滤膜 ，把滤膜立即放置到培养皿中，使之与培养基紧密接触，置于恒温培养箱培养14~16h。在暗室中观察是否有放光菌落 ? 实验步骤2菌种的分离纯化 首先用接种针在上步培养好的放光菌挑取少量，立即在无菌条件下在另一个培养皿上划线培养，暗室观察是否有单个放光点，应选择发光良好、外形圆整的单个菌落。 再次用接种针接触发光单菌落（暗室操作），再在另一个培养基上划线培养，观察发光菌落。经几次划线分离后，再将单菌落转接到斜面上保存。至此，发光菌分离成功。 良好单菌落的判定 生长良好的单菌落不仅发光明亮，在光照之下观察类似馒头形状，而且呈现水滴样透明无色 而混浊、有色或不圆整的菌落不宜选用，因为它们往往可能混有非发光的细菌，不是严格意义上的单菌落。 ? 暗室操作 在暗室进行划线操作十分困难，但是找放光点又必须在暗室进行，为了解决这一矛盾，可以用手电筒报上红色的透明纸来提供微弱的红光。发光点在红光的光照下会变成灰白色。而此时的不发光的杂菌菌落就不易显现，也不呈灰白色。这样较容易找到发光点的菌落。 菌落特征 通常透明无色如水滴，发蓝绿光类似馒头形状。 ? 单个菌的特征 菌体长约2~4微米，宽约0.5~0.8微米。为杆菌两端钝圆，也有弯曲成弧状的，一般单个存在，有鞭毛但很细需要特殊的染色方法使鞭毛加粗进而观察，鞭毛可能是一根也可能是多跟，有的发光菌具周身鞭毛。 也可用革兰氏染色法鉴定，发光菌为革兰氏阴性菌可染成红色的。 应用 该种发光细菌可以快速进行环境污染监测 在科研、医学等多方面有很大的应用空间 * * * 培养菌种 制做培养基 准备无菌 培养皿 培养菌种 鉴定 发光细菌待测菌株 纯化菌株 细胞形态观察 观看单菌落的形态特征 观察单个菌的形态特征 * * *