免疫标记技术讲义.pptVIP

返回 三、免疫酶技术的基本方法 酶联免疫吸附试验 （enzyme linked immunosorbent，ELISA） （1）直接标记法 （2）间接标记法 （3）夹心法 （4）竞争法 （5）抗体桥联法 （6）抗酶抗体法 （7）ELISPOT 返回 (1)直接标记法(direct labeling) direct ELISA—for Ag direct ELISA—for Ab 返回 （2）间接标记法（indirect labeling） 返回 （3）夹心法（sandwich assay） 返回 （2）间接荧光染色法 将荧光素标记在第二抗体（抗抗体）上或标记在SPA上，检测与抗原结合的特异性抗体。 （2）间接荧光染色法 优点：可检测多种不同的抗原抗体复合物，具一定通用性；敏感性高。 缺点：操作流程长、干扰因素多。 返回 （3）补体荧光染色法 将荧光素标记在补体的抗体上（抗C3抗体），检测抗原抗体复合物。 （3）补体荧光染色法 优点：可检测所有的抗原抗体系统，具通用性；敏感性高。 缺点：操作流程长、干扰因素多、非特异性荧光多，补体易失活、需新鲜制备不方便。 返回 FLASH （4）特殊染色法 ① 双标记免疫荧光技术 ② 双色免疫荧光技术 ③ 反衬染色法 返回 ①双标记免疫荧光技术 在同一标本中，可用两种不同颜色的荧光标记抗体进行免疫荧光染色，同时显示两种不同的细胞或同一细胞上不同类型的抗原。 ①双标记免疫荧光技术 如：FITC（黄绿色荧光）和RB200或TRITC9（桔红色荧光） 返回 ②双色免疫荧光技术 如FITC标记抗体和细胞核染色剂PI（碘化丙锭）。 双重染色标本的单色和双色观察 WU WIB DUAL BAND WIBA WIG WIB DAPI+FITC FITC+PI 多重染色标本的多色观察 FITC+Texas Red+DAPI 返回 ③反衬染色法 是用一种非特异染色来反衬一种免疫荧光试剂的特异性染色。 ③反衬染色法 如：用RB200标记牛血清白蛋白作为非特异性反衬标记，用FITC标记特异性抗体。 返回 第三节 免疫酶技术 1971年Engrail和Penlmann 以及Vanweemen和Schuurs两组学者分别用酶代替放射性同位素制备了酶标记试剂，创立了酶免疫分析技术（enzyme immunoassay，EIA）。 一、原理 二、建立免疫酶技术的条件 三、免疫酶技术的基本方法 四、通用与放大技术 第三节 免疫酶技术 返回 一、 原理 免疫酶技术 （enzyme immunoassay technique）： 就是将抗原和抗体的特异性免疫反应与酶的催化反应相结合而建立的一种免疫检测技术。 酶催化反应的两种基本形式： （1）E+S＝（ES）＝ E+P （2）E+S＝（ES） + D1 ＝ E + P + D2 E：酶 S：酶作用的底物 P：底物分解后的产物（有色化合物） D1：供氢体 D2：为D1的氧化型（有色化合物） 优点： ①灵敏度高，特异性强； ②可定性、定量检测可溶性 抗原和抗体，适用于普查； ③试剂来源广，稳定，保存 时间长，且无同位素污染； ④结果可肉眼半定量，也可用仪器定量检测，且仪器价格较低廉，可在大多数实验室开展； ⑤操作简便，易于掌握和使用，且重复性好； ⑥可用于定位组织细胞上的抗原或抗体成分。 缺点： 标记反应较难掌握，在操作过程中容易引起酶、抗原或抗体的失活。 返回 ?二、 建立免疫酶技术的条件 1．标记酶 2．免疫酶结合物的制备 3．酶标检测仪 返回 常用的标记酶 ① 辣根过氧化物酶 （horseradish peroxidase，HRP） ② 碱性磷酸酶 （alkaline phosphatase，AP） ③ 葡萄糖氧化酶 （glucooxidase，Glu） ④ ?-D-半乳糖苷 （?-D-galactosidase，?-D-Gal） 返回 阿尔茨海默症防治相关知识埃及的金字塔有建造方法动画艾司洛尔在神经外科重症中的应用二级二班防溺水等安全教育 第六章  免疫标记技术 第六章 免疫标记技术 第一节 放射免疫技术 第二节 免疫荧光技术 第三节 免疫酶技术 放射免疫技术 （radioimmunoassay，RIA） 第一节 放射免疫技术 Rosalyn Yalow （美国） （1977年获诺贝尔生理和医学奖） “for the development of radioimmunoassays of peptide hormones” Vet