第四章节 蛋白质的共价结构.ppt

第四章 蛋白质的共价结构; 本章重点内容 肽和肽键的结构 蛋白质的空间结构 蛋白质的空间结构和生物学功能;一、蛋白质的化学组成和分类;2、蛋白质的含氮量;3、蛋白质的大小与分子量;二、蛋白质的构象和蛋白质结构的组织层次;蛋白质的功能与分布;多细胞生物;氨基酸的连接方式——肽键(peptide bond);（一)肽和肽键;多肽链（polypeptide chain) 1、氨基末段（-NH2）和羧基末端（-COOH） 2、命名：“某氨基酰某氨基酰? ? ? ? ? ?某氨基酸” 3、肽链和肽键；主链和侧链；氨基酸残基 4、二硫键、链内二硫键和链间二硫键;在多肽链中，氨基酸残基按一定的顺序排列，这种排列顺序称为氨基酸顺序 通常在多肽链的一端含有一个游离的?-氨基，称为氨基端或N-端；在另一端含有一个游离的?-羧基，称为羧基端或C-端。 氨基酸的顺序是从N-端的氨基酸残基开始，以C-端氨基酸残基为终点的排列顺序。如上述五肽可表示为： Ser-Val-Tyr-Asp-Gln; 很多多肽都采用俗名，如催产素、胰岛素等。;（二）天然存在的重要多肽;垂体后叶分泌的催产素（9肽，促使妊娠子宫收缩）、加压素（9肽，升高血压）等。 一些抗生素（antibiotics）也是肽或肽衍生物，如短杆菌肽S。放线菌素（actinomycin D，国产品称更生霉素Dactinomycin, DTM）是从链霉菌属中分离出的，它可以与模板DNA结合抑制转录，从而抑菌，临床上用于恶性葡萄胎、绒毛膜上皮癌等，但毒性大，使用少。 ;一些蕈（mushrooms）产生的巨毒毒素也是肽类化合物，如α-鹅膏蕈碱是从鹅膏蕈属（或捕蝇蕈属）（Amanita phalloides）分离的环状八肽，它能与真核细胞的RNA聚合酶（RNA polymerase）Ⅱ牢固结合，使RNA的合成不能进行，但不影响原核生物的RNA合成。 脑啡肽是具有吗啡作用的5肽长度的活性肽，其功能不太清楚，但目前在神经生物学和神经精神病学中的研究前景广阔。 肌肉中的鹅肌肽（β-丙氨酰-1-甲基组氨酸）和肌肽（β-丙氨酰组氨酸），在骨骼肌中的含量很高，达20~30mmol，但其功能至今尚不清楚，估计与肌肉收缩有关。 ;谷胱甘肽（glutathione, GSH）： 是一种称为?-谷氨酰半胱氨酰甘氨酸的三肽化合物。;Glu-Cys-Gly | S | S | Glu-Cys-Gly;★解毒作用：与毒物或药物结合，消除其毒性作用； ★参与氧化还原反应：作为重要的还原剂，参与体内多种氧化还原反应； ★保护巯基酶的活性：使巯基酶的活性基团-SH维持还原状态； ★维持红细胞膜结构的稳定：消除氧化剂对红细胞膜结构的破坏作用。; 蛋白质是由一条或多条多肽(polypeptide)链以特殊方式结合而成的生物大分子。 蛋白质与多肽并无严格的界线，通常是将分子量在6000道尔顿以上的多肽称为蛋白质。 蛋白质分子量变化范围很大, 从大约6000到1000000道尔顿甚至更大。;; 我国1965年在世界上第一个用化学方法人工合成的蛋白质就是这种牛胰岛素。;胰岛素（Insulin）：;蛋白质一级结构的测定;蛋白质一级结构的测定 ①.多肽链数目的测定 根据蛋白质N端和C端残基的摩尔数和蛋白质的相对分子质量可确定分子中的多肽链数目。若含一条多肽链，蛋白质的摩尔数与末端基的摩尔数相等；如果后者是前者的倍数，说明该蛋白质分子是由多条多肽链组成。如果检测到的末端基多于一种，表明蛋白质由两条或多条不同的多肽链组成，即样品是杂多聚蛋白质（heteromultimeric protein）。;几条多肽链借助非共价键连接在一起，称为寡聚蛋白质，如血红蛋白为四聚体;②.拆分蛋白质的多肽链 寡聚蛋白质的亚基必须拆分。可用变性剂如8 mol/L尿素、6 mol/L盐酸胍或高浓度盐处理。 ;③.拆开多肽链内的二硫桥 若亚基间通过二硫桥（S-S）交联，如胰岛素（含两条多肽链）和α-胰凝乳蛋白酶（含3条多肽链）则可在可用8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍存在下，用过量的?-巯基乙醇处理，使二硫键还原为巯基，然后用烷基化试剂保护生成的巯基，以防止它重新被氧化。 ④.测定每一条多肽链的氨基酸组成 分离纯化的多肽链一部分样品完全水解，测定氨基酸组成，计算氨基酸成分的分子比或各种残基的数目。;现在已有氨基酸自动分析仪和蛋白质序列仪，对蛋白质多肽氨基酸排列顺序的测定提供了极大的方便。 ;;⑦.测定各肽断的氨基酸序列 最常用Edman降解法，并有自动序列分析仪可供利用，此外