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寄生虫实验技术 第一节 寄生虫学实验诊断技术 一、病原检查 二、免疫诊断及新技术应用 第二节 寄生虫人工培养 一、溶组织内阿米巴培养 二、阴道毛滴虫培养 第三节 寄生虫实验动物保种 一、杜氏利什曼原虫无鞭毛体 二、刚地弓形虫 三、旋毛虫 四、血吸虫 五、华支睾吸虫 六、卫氏并殖吸虫 第四节 寄生虫标本的保存 一、原虫包囊和虫卵的保存 二、蠕虫成虫的保存 三、昆虫的保存 四、原虫低温保存 第五节 寄生虫标本的包装与邮寄 第二十一章 寄生虫学实验技术 第一节 寄生虫学实验诊断技术 一、病原检查 (一)粪便检查 粪便检查是诊断寄生虫病常用的方法。要取得准确的结果，粪便必须新鲜，送检时间 一般不宜超过24小时。如检查肠内原虫滋养体，最好立即检查。盛粪便的容器要干 净，并防止污染与干燥；粪便不可混杂尿液等，以免影响检查结果。 1.直接涂片法 用以检查蠕虫卵、原虫的包囊和滋养体。方法简便，连续作3次涂片， 可提高检出率。 ⑴蠕虫卵检查：滴一滴生理盐水于洁净的载玻片，用棉签棍或牙签挑取绿豆大小的粪 便块，在生理盐水中涂抹均匀；涂片的厚度以透过涂片约可辨认书上的字迹为宜。一 般在低倍镜下检查，如用高倍镜观察，需加盖片。应注意虫卵与粪便中异物的鉴别。 虫卵都具有一定形状和大小；卵壳表面光滑整齐，具固有色泽；卵内含卵细胞或幼 虫。 ⑵原虫检查： 1)活滋养体检查：涂片应较薄，方法同查蠕虫卵。气温愈接近体温，滋养体的活动愈 明显。必要时可用保温台保持温度。 2)包囊的碘液染色检查：直接涂片方法同上，以一滴碘液代替生理盐水。如碘液过 多，可用吸水纸从盖片边缘吸去过多的液体。若同时需检查活滋养体，可在用生理盐 水涂匀的粪滴附近滴一滴碘液，取少许粪便在碘液中涂匀，再盖上盖片(图21-1)。涂 片染色的一半查包囊；末染色的一半查活滋养体。 图21-1 原虫包囊碘液染色操作方法 碘液配方：碘化钾4g，碘2g，蒸馏水100ml。 3)隐孢子虫卵囊染色检查：目前较佳的方法为金胺酚改良抗酸染色法。对于新鲜粪便 或经10%福尔马林固定保存(4℃1个月内)的含卵囊粪便都可用此法染色。染色过程是 先用金胺-酚染色，再用改良抗酸染色法复染。方法步骤如下： 金胺-酚染色法： ①染液配制：1g/L金胺-酚染色液(第一液)：金胺0.1g，石碳酸5.0g，蒸馏水 100ml；3%盐酸酒精(第二液)：盐酸3ml，95%酒精100ml；5g/L高锰酸钾液(第三液)： 高锰酸钾0.5g，蒸馏水100ml。 ②染色步骤：滴加第一液于晾干的粪膜上，10～15分钟后水洗；滴加第二液，1分钟 后水洗；滴加第三液，1分钟后水洗，待干；置荧光显微镜检查。 低倍荧光镜下，可见卵囊为一圆形小亮点，发现乳白色荧光。高倍镜下卵囊呈乳白或 略带绿色，卵囊壁为一薄层，多数卵囊周围深染，中央淡染，似环状，或深染结构偏 位，有些卵囊全部为深染。但有些标本可出现非特异的荧光颗粒，应注意鉴别。 改良抗酸染色法： ①染液配制：石炭酸复红染色液(第一液)：碱性复红4g, 95%酒精20ml，石炭酸 8ml，蒸馏水100ml；10%硫酸溶液(第二液)：纯硫酸10ml，蒸馏水90ml(边搅拌边将硫 酸徐徐倾入水中；20g/L孔雀绿液(第三液)：20g/L孔雀绿原液1ml，蒸馏水10ml。 ②染色步骤：滴加第一液于粪膜上，1.5～10分钟后水洗；滴加第二液，1～10分钟后 水洗；滴加第三液，1分钟后水洗，待干；置显微镜下观察。 经染色后，卵囊为玫瑰红色，子孢子呈月牙形，共4个。其他非特异颗粒则染成蓝黑 色，容易与卵囊区分。 不具备荧光镜的实验室，亦可用上述方法先后染色，然后在光镜低、高倍下过筛检 查，发现小红点再用油镜观察。效果好，可提高检出速度和准确性。 2.厚涂片透明法(改良加藤法)取约5mg(已用100目不锈钢筛除去粪渣)粪便，置于载玻 片上，覆以浸透甘油-孔雀绿溶液的玻璃纸片，轻压，使粪便铺开(20×25mm)。置于 30～36℃温箱中约半小时或25℃约1小时。待粪膜稍干，即可镜检。 玻璃纸准备：将玻璃纸剪成22×30mm大小的小片，浸于甘油-孔雀绿溶液(含纯甘油 100ml、水100ml和3%孔雀绿1ml的水溶液)中，至少