原创力文档- 1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
- 2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
实验13-PCR反应
多聚酶链式反应（PCR）;了解PCR的基本原理，掌握PCR的基本操作技术;多聚酶链式反应是在模板DNA、引物和4种脱氧核苷酸存在的条件下依赖于DNA聚合酶的体外酶促合成反应。
由高温变性，低温退火和适温延伸三步反应组成一个循环，通过多次循环反应，使目的DNA得以迅速扩增;1、变性（94℃） ：
使DNA双螺旋的氢键断裂，双链解离成单链DNA
2、退火（55℃）：
引物和其互补的模板在局部形成杂交链
3、延伸（72℃）：
通过Taq DNA聚合酶使4种单核苷酸从引物的3`端开始掺入，沿模板从5`向3`端方向延伸，合成与模板DNA的互补链。; ;双链DNA分子;双链断开;模板与引物结合;循环1;循环1;循环1;双链断开;模板与引物结合;循环2;94℃变性
双链断开;循环3;循环3;循环n;水稻总DNA
PCR仪，台式离心机，电泳仪，电泳槽
2ml离心管架，移液枪，1. 5ml离心管，0.2ml离心管，枪头
dNTP，Taq酶，引物一对（RM1 F，RM1 R），10×PCR反应缓冲液，灭菌双蒸水，; 1、PCR反应混合液的制备
2μl DNA
0.4μl dNTP（10mM）
1.5μl 引物 F（2 μM） RM1 F
1.5μl 引物 R（2 μM） RM1 R
0.3μl Taq 酶（5U/μl）
2.0μl反应缓冲液（含15mM MgCl2）
13μl ddH2O
混匀，放入PCR仪中开始反应;2、PCR反应程序设计如下
94 ℃，预变性5分钟
94 ℃，变性1分钟
55 ℃，退火1分钟 30个循环
72 ℃，延伸1分钟
72 ℃，延伸5分钟;所有的溶液都应该没有核酸和核酸酶的污染
所有PCR试剂中用的水都应该是最高质量的双蒸水
所有试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意然后再分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性
PCR管和枪头都一次性使用;
文档评论（0）