糖化酶的固定实验.docVIP

糖化酶的固定化实验 实验目的 本实验为酶工程综合实验。由教师给定题目，学生通过查阅文献，并结合所学知识自行设计实验方案，列出所需试剂和材料及仪器等，然后在教师知道下根据自己设计的实验方案进行实验；从而培养学生独立实验的能力；并掌握酶活测定方法，米氏常数测定，学习固定化酶的常用方法及固定化酶的表征。 二、实验原理 糖化酶是一种用途广泛的酶，粮食工业、食品工业、发酵工业都经常使用。随着生物技术的迅速发展,糖化酶的生产和使用水平也有了进一步的提高。 固定化技术是近年来迅速发展的一种崭新技术，固定化酶同游离酶相比有很多优点,它开辟了酶的许多新用途。游离酶可通过各种固定化方法，增加其稳定性并且有利于连续化生产和重复使用。酶固定化后可用各种理化性质的变化来表征其效果。 糖化酶活力的测定采用次碘酸钠法。糖化酶能从淀粉分子非还原性末端开始，分解α-1, 4葡萄糖苷键生成葡萄糖。葡萄糖分子中含有醛基，能被次碘酸钠氧化，过量的次碘酸钠酸化后析出碘，再用硫代硫酸钠标准溶液滴定，由此可计算酶活力。次碘酸钠法的原理为在碱性介质（NaOH）中，碘歧化为次碘酸钠和碘化钠，次碘酸钠氧化溶液中游离的醛基为酸基。适当酸化，剩余的次碘酸钠与碘酸钠又生成碘，以淀粉为指示剂，用硫代硫酸钠标准溶液滴定。根据总碘量和硫代硫酸钠的用量，可对应获得甲醛的量。反应为：  I2+2OH-=OI-+I-+H2O