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Celigo 活细胞原位分析工作站培训计划 AUG 2012 目的: 帮助使用者彻底了解Celigo 工作基本原理以及操作方式. 包括微孔板设置, 影像撷取, 白光/萤光观察, 资料分析, 数据呈现以及报告输出. 使用者可以自行 上机实际操作. 所需材料: 培养盘: Corning 96 孔黑色培养盘 附着性细胞株 (C1 带有萤光蛋白或染剂的同型细胞株 (C2 细胞株以实验室常用的细胞即可，原则上细胞体积不可太小，过度摊平的细胞也 不好，建议使用Hela 或293T。 萤光观察: 1, 稳定表达细胞细(绿色萤光蛋白GFP, 或是红色萤光蛋白RFP)为佳. 2, 若无上述细胞 可做细胞萤光染色, 建议使用: Hoechst 以及 Calcein-AM 若是稳定表达萤光蛋白的细胞株，请先以不同细胞厚度于培养盘上培养。若使用 瞬时转染来表现萤光蛋白的细胞株，则需预估最佳表现时间，提前在培养盘上进 行培养，以利实验上的观察。若是将细胞固定后以萤光染剂进行染色，染色后请 避光并保持于PBS 中。 1. 萤光波长范围与建议使用染剂 2. 377/447nm e.g. Hoechst, DAPI 3. 483/536nm e.g. FITC, Calcein, Alexa 488, GEP 4. 531/629nm e.g. PI, Texas Red, Alexa 568 4 起始细胞濃度: 1 x 10 cells/ml (D1 6 1 x 10 cells/ml (D2 依照上述濃度养细胞后, 再培养隔夜 Experiment layout: 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 A B C1D1 C2D1 C C1D1 C2D1 D C1D1 C2D1 E C1D2 C2D2 F C1D2 C2D2 G C1D2 C2D2 H 教用流程: 简介说明 简单开场介绍Celigo 机器规格与影像撷取上的特性，提供人员对仪器的简略 概念。 影像撷取 从选择培养盘、命名、应用挑选、到亮视野/萤光通道设置、焦距设置等，进 而获得目标细胞培养孔的影像，以供后续的分析。 载入培养盘的下拉式菜单 影像撷取整体介面面板 光通道撷取设置面板 焦距设置面板 分析 得到影像后，进行细胞分析的各参数设置，如面积、直径、萤光强度等。目 的为获得最佳选取效果，以得到合理结果。分析后到结果页面进行结果审视， 以及资料存贮。 分析整体介面面板 细胞圈选轨迹设置 细胞圈选参数面板 细胞过滤参数面板 分析结果呈现介面面板 分群 利用分群介面进行制图，获取细胞计数、萤光定量、与不同影像参数间相互 关系之结果。 分群制图介面面板 制图菜单面板 范例一:长方图 范例二: XY 分布图 时间表: 于am9:00 开始，进行简介、影像撷取、分析、分群等仪器教用培训，预计中午 前可结束。 pm1:30 开始，供培训人员练习上述步骤，理想培训人数为3 人以下，以提高培 训效率与人员熟悉度。预计每人练习时间为一个小时。