hcic优化和放大抗体纯化条件.pdfVIP

应用指南 USD2409 采用MEP HyperCel™ 填料的疏水性电荷诱导层析法（HCIC ） 对抗体纯化条件进行优化和放大研究：应用于单克隆小鼠IgG1 采用MEP HyperCel™ 填料的疏水性电荷诱导层析法（HCIC ）对抗体纯化条件进行优化和 放大研究：应用于单克隆小鼠IgG1 近 中 性 本研究说明了什么 pH 吸附 本项有关MEP HyperCel 填料的HCIC 研究表明， ( 疏水性 相 互 作 高纯度抗体可通过一步吸附法直接进行高产量回 用) 收，甚至可从含有高浓度污染蛋白的原料中进行 回收，如白蛋白。根据样品中蛋白的相对疏水性 和阶段性洗脱的pH 值，HCIC 双模式机制可对洗 在 pH 脱条件进行精确调整。这种机制可对污染物中的 5.8-4 时解 目标抗体进行高效、选择性地吸附。使用常规低 吸( 静电 排斥) 成本缓冲液优化后，可获得97%纯度和97%产量 的抗体，与利用A 蛋白树脂的亲和力从非浓缩原 MEP HyperCel 填料末端基团 料中直接吸附获得的产物相似。 最后，MEP HyperCel 是一种可工业化放大的填 料，可用1 M 氢氧化钠清洗，是一种可用于大规 模IgG 吸附的经济有效的方法。 1. 介绍 MEP HyperCel 填料吸附/洗脱机制。 BioSepra MEP HyperCel 的疏水性电荷诱导层析 3. 材料和方法 法（HCIC ）是一种专门为从各种原料中纯化和回 收抗体而研发的层析方法。这种方法可以在生理  样品：对两种不同的细胞培养物上清液 pH 下直接吸附抗体，并在弱酸性pH 下进行洗脱。 （CCS ）进行优化，包括细胞培养基中含有的白 经过短期优化研究后可以达到高产量和高纯化， 蛋白和转铁蛋白：浓缩30 倍的CCS （小鼠IgG1: 因此MEP HyperCel 被定位为一种经济有效、功 1.5 mg/mL）和非浓缩型CCS[IgG1: 0.043 mg/mL]。 能强大的亲和树脂替代产品。  层析法：采用使用MEP HyperCel 填料（Pall ） 本研究表明，MEP HyperCel 填料可在一步操作 的HCIC 层析法，PBS 平衡，pH 7.4 。CCS 直接 中方便地应用于对小鼠IgG1 的有效吸附及纯化。 上样到层析柱；过柱结束后，MEP HyperCel 填 料采用大约相当于5 倍柱体积的1 M NaOH 进行 2. 目的 复原。小规模分析运行可以在 ÄKTA* Explorer 100 (GE Healthcare)上进行，大规模分析运行可以 对疏水性电荷诱导层析法（HCIC ）进行优化，使 在PKL6 层析系统（Pall ）上进行。 其成为对治疗和诊断用单克隆抗体直接吸附的亲 和层析法（A 蛋白）的潜在替代方案。最终目的  分析：应用SDS（12%丙烯酰胺凝胶） 是设计一种功能强