10植物组织培养实验室.ppt

（二）灭菌设备 维持相对的无菌环境是植物组织培养实验室的基本要求。 1、高压灭菌锅 用于培养基、玻璃器皿以及其它可高温灭菌用品的灭菌，根据规模大小有手提式、立式、卧式等不同规格。 2、干热消毒柜 用于金属工具如镊子、剪刀、解剖刀，以及玻璃器皿的灭菌。一般选用200℃左右的普通或远红外消毒柜。 3、过滤灭菌器 用于一些酶制剂、激素以及某些维生素等不能高压灭菌试剂的灭菌，主要有真空抽滤式和注射器式。 4、紫外灯 方便经济的控制无菌环境的装置，缓冲间、接种室和培养室必备。 （三）无菌操作设备 1、接种箱 使用较早的最简单的无菌装置，主体为玻璃箱罩、入口有袖罩，内装紫外灯和日光灯，使用时对无菌室要求较高。 2、净化工作台 其操作台面是半开放区，具方便、操作舒适优点，通过过滤的空气连续不断吹出，大于0.03um直径的微生物很难在工作台的操作空间停留，保持了较好的无菌环境。由于过滤器吸附微生物，使用一段时间后过滤网易堵塞，因此应定期更换。 超净工作台 （四）培养设备 指根据需要所选用的不同规格和控制精度的用于植物细胞、组织和器官培养的设施和设备。 1、培养架 目前植物组织培养实验室植株繁殖培养的通用设施。成本低、设计灵活、充分利用培养空间。一般有4-5层，层间间隔40-50cm，光照强度可根据培养植物特性来确定，一般每架上配备2-4盏日光灯。 2、培养箱 细胞培养、原生质体培养等要求精确培养的实验，可用光照培养箱、CO2培养箱、湿度控制培养箱等培养。 3、摇床 进行液体培养时，为改善通气状况，可用振荡培养箱或摇床。 4、生物反应器 进行植物细胞生产次生产物的实验室，还需生物反应器。 5. 烘箱（干燥箱） 80℃ 测定植物组织干重 80-100 ℃ 烘干物品 150-160 ℃ 干热灭菌 （五）其他设备 时间程序控制器、温度控制系统或空调 实体显微镜、倒置式生物显微镜及配套的摄影、录像和图像处理设备 电泳仪、萃取和层析设备 紫外分光光度计、高效液相色谱仪、 气相色谱仪、酶联免疫测定系统。 小型臭氧发生器 8. 细胞培养设备 9. 培养架 10、细胞学鉴定设备 光学研究显微镜、实体显微镜、倒置显微镜 光学显微镜 二、培养容器与用具 培养容器指盛有培养基并提供培养物生长空间的无菌置，培养用具指培养物接种封口所用的各种金属或塑料制品，实验室必备。 （一）培养容器 包括各种规格的培养皿、三角瓶、试管、培养瓶。一般分为： 玻璃容器—一般用无色并不产生颜色折射的硼硅酸盐玻璃材质。 塑料容器—材质轻、不易破碎、制作方便，广泛使用。一般为聚丙烯、聚碳酸酯材料的培养容器。 培养容器 （二）金属用具 1、镊子 植物组织解剖用小的尖头镊子，分株转移繁殖转接用枪型镊子，16-22cm长。 2、剪刀 不锈钢医用弯头剪，做取材和切段转移繁殖，14-22cm长。 3、解剖刀 进行组织切段，多用短柄可换刀片的医用不锈钢解剖刀。 4、其他用具 接种铲、接种针在花药培养、花粉培养中有用。 无菌操作器械 （三）塑料用具 各种封口膜、盖、塑料盘及其它实验用具。 第三节 基本操作 一、洗涤 （一）重铬酸钾洗涤法 饱和重铬酸钾洗液的配制方法是：将43g重铬酸钾溶与1000ml蒸馏水（20℃可以达到饱和状态），制成重铬酸钾饱和水溶液。然后缓慢加入浓硫酸，最后使重铬酸钾饱和水溶液以浓硫酸比例达到1：1。在配制过程中，只能把浓硫酸缓慢加入进去，决不可把重铬酸钾水溶液加入浓硫酸中，因会产生大量热量而来不及扩散，从而引起浓硫酸溅出。 洗涤方法： 一般用具：用水洗净玻璃器皿，晾干后放入重铬酸钾洗涤液中，浸泡1夜，第二天取出，用自来水冲洗，然后用蒸馏水洗两次。干燥后备用。 小的玻璃制品法： 吸管：先用自来水冲洗，放在特制的防腐不锈钢网筒内，用重铬酸钾浸泡一夜，再将网筒放入虹吸式自动冲洗装置中，用自来水冲洗数十次，最后用蒸馏水冲洗，干燥后备用。 （二）洗涤剂洗净法 重铬酸钾洗液的最大缺点是铬离子会造成环境污染，因此，应尽量避免使用。 普通无磷中性洗涤剂，是理想的选择。 （三）超声波洗净法 这是一种物理的洗净法，对环境无任何污染，而且对比较顽固的污垢也十分有效，但超声波发生器容量有限，因此，常用来清洗较小的玻璃仪器和器械。 方法：将玻璃制品放入超声波洗净器中，注入自来水，设定时间，然后进行处理，拿出用自来水冲净，蒸馏水冲洗。 （四）玻璃器皿的清洗 新购置的玻璃器皿：带有游离的碱性物质，先用1%的稀盐酸浸泡1夜，再用肥皂水洗净，清水冲洗，蒸馏水冲淋，烘干。 已用过的培养器皿：去掉培养基，洗涤剂溶液浸泡