用三色荧光原位杂交three－colorfish.pdfVIP

遗 传 学 报，26(5):458 467,1999 ActaGeneticaSinica 用三色荧光原位杂交 T（hree-ColorFISH) 检测小鼠精子中染色体数目异常的研究 史庆华’，“I.-D．Adler2余 龙’张坚宣 ‘ (1复旦大学遗传所 上海 200433) （2GSF-InstituteofGenetics,NationalResearchCenterforEnvironment andHealthI-85764Neuherberg,Germany) 摘要 用小鼠X,Y和8号染色体特异的DNA探针，与经DTT (dithiotreitol)和LIS(lithium3, 5-diiodosalicylicacid）解聚的小鼠附罩精子进行三色荧光原位杂交 fl（uorescenceinsitu hybridization,FIS琦，以检测精子中的染色体数目异常，并与MMII染色体分析比较。结果表 明精子三色FISH具有以下优点和特点：(1)方法敏感稳定，且简便快速；(2)在每一个体至少 分析 10000尾精子的基础上计算非整倍体率，因此结果更为准确；(3）能检测多倍体即减数分 裂停止的发生率及停止的时期；(4)不仅能测定发生于减数分裂 I(MI）的染色体分离异常，还 能检测发生于减数分裂 IIMI( ）的不分离和丢失。并对探针的选用、分析标准的建立以及三 色FISH用于精子染色体分析的必要性等进行了讨论。 关键词 三色荧光原位杂交 F（ISH)，小鼠，精子，非整倍体，多倍体 分类号 0343 在人类受精卵中，具有染色体异常的约占10%-30%；其中，以非整倍体最为常见，对 人类危害也最大[11［。因此，了解非整倍体的发生机制、确定其诱发因素，从而减少非整倍体 的发生，引起了人们的普遍关注。由于绝大多数非整倍体起源于减数分裂过程中染色体 的分离异常，于是对配子染色体的分析显得尤为重要2[1［0 精子染色体的分析方法主要有：精子一仓鼠卵融合技术和精子荧光原位杂交 F（ISH）分 析。前者，由于其技术难度大，劳动强度高，全球只有屈指可数的实验室能进行这种分 析[31［。而且，自该方法建立20多年来，文献报道的用其分析的精子总数尚不足30000个[41［ 且其中大部分报道是基于对每一个体不足100个精子的研究[51［。因此，利用该方法难以准 确了解精子中非整倍体的发生率。精子FISH分析则可克服这些不足，并能提供有关减数 分裂停止 表（现为多倍体精子）的信息。迄今，已利用这一方法确定了人类各种异常精子 的自发频率6[,［71，并对年龄[81、抽烟[91及化疗药物 。〔，‘等对减数分裂停止和染色体分离异常的 效应进行了广泛研究，获得了大量资料。同时，精子FISH方法本身也得到了长足发展，如 从单色发展为二色和三色FIS仔6,7,11]，从而克服了单色及用性染色体探针进行的二色 本文于1998-07-27收到，1998-12-23修回 史庆华等：用三色荧光原位杂交T（hree-ColorFIS功 5期 检测小鼠精子中染色体数 目异常的研究 459 FISH不能正确区分二体和二倍体精子以及缺体精子和杂交失败等不足。然而，欲阐明待 测因子对减数分裂的作用模式，以及确定待测因子的反应阂值，动物实验必不可少3[1［0 Wyrobek等首次利用二色FISH，分析了小鼠精细胞中X和S号染色体二体的频率[12［1；随 后，Lowe等利用三色FISH，研究了年龄与X,Y和8号染色体二体精细胞率的关系1【31。但 为了与人精子FISH分析结果的可比性，Lowe等对精细胞三色FISH技术进行了改进，使 之适用于对附肇精子的分析[14［1oAdler等则首次利用这一方法对小鼠二倍体和非整倍体 精子的自发频率进行了评估[15［1。而有关用该方法检测化学或物理因子在减数分裂中的非 整倍体诱导活性，则尚未见报道。 本文首次把三色FISH分析，用于经已知的生殖细胞非整倍体诱导剂灰黄霉素 (griseofulvin,GF)[151处理后，小鼠附攀中二体及二倍体精子发生率的研究；并与减数分裂 中期11(MMII）染色体分析比较。对探针的选用、分析