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毛细管电泳文献综述
毛细管电泳技术的研究进展
摘要:本文介绍了毛细管电泳法近几年的研究进展。详细的介绍了毛细管电泳法的原理和分离模式,详细的综述了毛细管电泳法的分析应用,并对这一技术的发展前景作出展望。引用文献24篇。
关键词:毛细管电泳;应用进展;综述
毛细管电泳简介
毛细管电泳(CE)的基本原理是根据在高压电场作用下离子迁移的速度不同对组分进行分离和分析,它是以两个电解槽和与之相连的毛细管为分离通道,由于C E 所用的石英毛细管柱在 pH 3 的情况下,其内表面带负电,和缓冲溶液接触时形成一双电层,在高压电场的作用下,双电层中的水合阳离子引起流体整体地朝向负极方向移动形成电渗流(E O F)同时,在缓冲溶液中,带电离子在电场的作用下,以不同的速度向其所带电荷极性相反方向移动,形成电泳。粒子在毛细管内缓冲液中的迁移速度等于电泳和 E O F 两种速度的矢量和。正离子的电泳运动方向与 E O F 方向一致,因此最先流出;中性粒子的电泳速度为零,因此其迁移速度相当于 E O F 速度;负离子的电泳运动方向和 E O F 方向相反,但因为 E O F 速度一般大于电泳速度,因此它将在中性粒子之后流出,从而各种粒子迁移速度不同而实现分离。C E 具有高效(每米理论塔板数为几十万,高者可达 10^6)、快速(一般分析时间只需几十秒至三十分钟)、 进样体积小(只需纳升级)、分析对象广(小到无机离子,大到整个细胞)、 易于自动化、操作简便、溶剂消耗少、实验成本低和环境污染小等优点正因为 C E 如此诱人的优点,使它在短短的二十几年中,特别是最近这几年中,受到分离科学家的极大关注,成为生物化学和分析化学中最受瞩目,发展最快的一种分离技术。
毛细管电泳的分离模式
经典的毛细管分离模式有毛细管区带电泳(CZE)、毛细管胶束电动色谱(MECC)、毛细管凝胶电泳(CGE)等;目前新建立的分离模式和联用技术有阵列毛细管电泳(CAE),亲和毛细管电泳技术(ACE),芯片毛细管电泳(CCF),非水毛细管电泳技术(NACE)。下面简要介绍一下几种常见的毛细管电泳分离技术。
(一)毛细管区带电泳(capillary zone electrophoresis,CZE)
最基本的也是最常见的一种操作???式,用以分析带电溶质。为了降低电渗流和吸附现象,可将毛细管内壁涂层【1】。应用范围最广,可用于多种蛋白质、肽、氨基酸的分析。孙国庆等【2】利用毛细管电泳法测定乳品中乳铁蛋白的含量。刘莹等【3】运用区带毛细管电泳分析方法测定乳粉中的三聚氰胺。
(二)胶束电动毛细管色谱(micellar electrokinetic capillary chromatography,MECC)
在缓冲液中加入离子型表面活性剂,如十二烷基硫酸钠,形成胶束,被分离物质在水和胶束相(准固定相)之间发生分配并随电渗流在毛细管内迁移,达到分离。MECC是唯一一种既能用于中性物质的分离又能分离带电组分的CE模式。臧晓欢等【4】评述了离子液体在毛细管电泳中的应用及进展。唐俊等【5】运用胶束电动毛细管电泳法测定维生素B4的含量。
(三)毛细管凝胶电泳(capillary gel electrophoresis,CGE)
在毛细管中装入单体,引发聚合形成凝胶。CGE分凝胶和无胶筛分两类,主要用于DNA、RNA片段分离和PCR产物分析及蛋白质等大分子化合物的检测。方梅、胡波等【6】评述了21世纪毛细管电泳在刑侦分析中的应用,重点是DNA方面的应用。
(四)亲和毛细管电泳
在毛细管内壁涂布或在凝胶中加入亲和配基,以亲和力的不同达到各组分的分离。可用于研究抗原-抗体或配体-受体灯特异性相互作用。
(五)毛细管电色谱(capillary electrochromatography,CEC)
将高效液相色谱(HPLC)的固定相填充到毛细管中,或在毛细管内壁涂布固定相,以电渗流为流动相驱动力的色谱过程。此模式兼具电泳和液相色谱的特点。
(六)毛细管等电聚焦电泳(capillary isoelectric focusing,CIEF)
通过内壁涂层使电渗流减到最小,在两个电极槽分别装酸和碱,加高电压后,在毛细管内壁建立pH值梯度,溶质在毛细管中迁移至各自的等电点,形成明显区带。聚焦后,用压力或改变检测器末端电极槽贮液的pH值使溶质通过检测器。CIEF已经成功用于蛋白质等电点,分离异构体等分面。
(七)毛细管等速电泳(capillary isotachophoresis,CITP)
采用先导电解质和后继电解质,使溶质按其电泳淌度不同得以分离。
(八)CE/MS联用
CE的高效分离与MS的高鉴定能力结合,成为微量生物样品,尤其是多肽、蛋白质分离分析的强有力工具、可提供分子量及结构信息,适于目标化合物分析或窄质量范围内扫描分析,如多环芳香
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