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第二节 毒理学评价;;一、初步工作;二、第一阶段：急性毒性试验 急性毒性试验是指一次给予受试物或在短期内多次给予受试物对机体所产生的毒性反应(中毒或死亡)。 1、试验目的 （1）测定LD50，了解受试物的毒性强度、性质和靶器官。 （2）为以后的蓄积性试验和亚慢性毒性试验的剂量和毒性判定指标的选择提供依据。 2、试验要求 分别用两种性别的小鼠和/或大鼠进行。 3、试验项目 测定LD50和7d喂养试验。;（1） LD50 即半数致死量，它是指受试动物经口一次或在24小时内多次染毒后，能使受试动物中有半数死亡的剂量，单位为mg/kg。 ;（2）7d毒性试验 7d喂养试验是以7d向几组动物每日分别重复给予一定剂量，一般可设三个四个剂量组，在试验中可得一最小有作用剂量，通过公式可即可估计90d以至二年喂养试验的最小有作用剂量，再在此剂量上下各设几个剂量组，就可以进行90d或二年毒性试验了。;4、结果判定 （1） 如LD50剂量或7d喂养试验后最小有作用剂量小于人的可能摄入量的10倍者，则放弃该受试物用于食品，不再继续其他毒性试验。 （2）如大于10倍者，可进行下一阶段的毒理学试验。 （3）凡在10倍左右时，应进行重复试验，或用另外一种方法验证。;三、遗传毒性试验（蓄积毒性试验、致突变试验） 1、蓄积性试验 试验目的是了解受试物在体内的蓄积情况。 （1）分类：物质蓄积和功能蓄积 （2）试验内容：蓄积系数法或20天试验法;2、致突变试验 （1）细菌致突变试验——Ames试验 亦称鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶试验法。基本原理是以一种致突变微生物与受试化学物质接触，并以哺乳动物肝微粒体进行受试化学物的代谢活化，如受试物经活化代谢后具有致突变性，则可使突变形微生物回复突变而重新成为野生型微生物。一般主要以沙门氏菌的组氨酸缺陷型的菌株，在被检物质存在下，就又回到组氨酸的非缺陷型的野生菌。;;（3）睾丸生殖细胞染色体畸变分析试验和精子畸形试验 睾丸生殖细胞染色体畸变分析其基本原理与方法同骨髓细胞染色体畸变分析。实验结束后取出动物睾丸，用低渗氯化钾溶液进行处理后，固定??制片、染色，最后观察精原细胞染色体畸变情况。 精子畸形试验根据受试化学物如能影响实验动物的精子成熟过程，则可观察到精子头部或尾部的形态变化。 ;（4）显性致死试验和DNA修复合成试验 ;;3、结果判定 （1）如果其中三项试验均为阳性，则无论积蓄性如何，均表示受试物很可能具有致癌作用，除非受试物具有十分重要的价值，一般应予以放弃，不需要进行其它项目的毒理学试验。 （2）如果其中两项为阳性，而又有强积蓄性，则应予以放弃，如为弱积蓄性，由有关专家进行评议，根据受试物的重要性和可能摄入量等，综合权衡利弊再作决定。 ;（3）如果其中一项试验为阳性，则再选择备选遗传毒性试验中的两项其他致突变试验，如再选的两项均为阳性，则无论蓄积性如何均放弃，如有一项为阳性，而且为强蓄积性，则应放弃，如果一项为阳性且为弱蓄积性，则可进入第三阶段试验。 （4）如果四项试验均为阴性，则无论蓄积性如何，均可进入第三阶段亚慢性毒性试验。;四、第三阶段：亚慢性毒性试验 亚慢性毒性是指实验动物连续多日接触较大剂量的外来化合物所出现的中毒效应。能了解试验动物在多次给予受试物时所引起的毒性作用。 1、试验目的 （1）观察受试物以不同剂量水平较长期喂养，确定动物的毒性作用和靶器官，并初步确定最大无作用剂量。 （2）了解受试物对动物繁殖及对仔代的致畸作用。 （3）为慢性毒性和致癌试验的剂量选择提供依据。 （4）为评价受试物能否应用于食品提供依据。;2、试验项目 （1）90天喂养试验 （2）繁殖试验 （3）代谢试验 根据这三项试验中所采用的最敏感指标所得的最大无作用剂量进行评价。;3、代谢试验 代谢试验是一种阐明外来化学物质进入机体后在体内吸收、分布与排泄等生物转运过程和转变为代谢物的生物转化过程的试验。其目的是： （1）了解受试物在体内的吸收、分布和排泄速度以及蓄积性； （2）寻找可能的靶器官； （3）为选择慢性毒性试验的合适动物种系提供依据； （4）了解有无毒性代谢产物的形成。;4、结果判定方法为： （1）试验项目中任何一项的最敏感指标的最大无作用剂量（MNL）小于或等于人体可能摄入量的100倍者，表示毒性较强，应放弃受试物用于食品。 （2）最大无作用剂量大于100倍而小于300倍者，应进行慢性毒性试验。 （3）最大无作用剂量大于或等于300倍者，则不必进行慢性毒性试验，可进行安全性评价。;五、第四阶段：慢性毒性试验（包括致癌试验） 慢性毒性是指外源化