实验11——食品中游离氨基酸测定 .pptVIP

实验十一：食品中游离氨基酸的测定 （茚三酮法） 1．实验原理 凡含有自由氨基的化合物，如蛋白质、多肽、氨基酸（脯氨酸除外）在碱性溶液中与水合茚三酮共热时，产生紫色化合物，最大吸收波长在570nm处，在一定浓度范围内，颜色深浅与氨基酸含量成正比，可用比色法进行测定。 * 氨基酸与茚三酮的反应分两个步骤： * 2. 实验材料、仪器与试剂 材料：酱油 仪器：可见分光光度计，分析天平，容量瓶，移液管，具塞刻度试管。 试剂：茚三酮、氯化亚锡、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、标准氨基酸（异亮氨酸）。 * 试剂配制：（P64） （1）2%茚三酮溶液 （2）pH8.04的磷酸缓冲液 （3）氨基酸标准溶液：200μg/mL异亮氨酸标准溶液。 * 3. 实验步骤 （1）样品的处理：准确吸取0.5mL酱油于100mL烧杯中，加入5g活性炭和50mL蒸馏水，置于80℃水浴锅中，保持半小时后过滤，用蒸馏水将滤渣清洗数遍，收集滤液于100mL容量瓶中，定容至刻线，摇匀备用。 * （2）标准曲线的绘制 管号 1 2 3 4 5 6 7 氨基酸标准溶液/mL 0 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1.0 水/mL 1.6 1.1 1.0 0.9 0.8 0.7 0.6 磷酸盐缓冲液/mL 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 茚三酮/mL 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 氨基酸含量/μg 0 100 120 140 160 180 200 各种试剂加到比色管后混匀，于电炉上沸水浴15min，取出冷却至室温后加水至10mL刻度线，静置15min后，在570nm处测定吸光度，以氨基酸含量(μg)为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。 * （3）样品测定 管号 8 9 10 11 样品溶液/mL 0 0.5 0.5 0.5 水/mL 1.6 1.1 1.1 1.1 磷酸盐缓冲液/mL 0.4 0.4 0.4 0.4 茚三酮/mL 0.4 0.4 0.4 0.4 按上表加样后混匀，按标准曲线的步骤进行实验，在相同条件下测定样品的吸光度，并在标准曲线上查出氨基酸含量微克数。 * 4.结果计算 式中： C——从标准曲线上查得的氨基酸含量，μg K——稀释倍数 V——测定时取样量，mL 氨基酸（g/100mL）= C×K V×106 ×100 *