生物化学 王镜岩 第四章蛋白质共价结构课件 .ppt

(1) 有一个特殊的γ-肽键， (2) 有一个活泼的SH-，很容易氧化，两 分子GSH以二硫键相连成氧化性的谷 胱甘肽（GSSG) (3) 参与细胞内氧化还原过程，作为某些氧 化还原酶的辅因子，清除内源性过氧化 物和自由基，防止过氧化物积累维护巯 基酶活性中心的巯基处于还原状态。 * 2.脑啡肽（5肽） Met--- 脑啡肽：Tyr—Gly—Gly— Phe—Met Leu----脑啡肽： Tyr—Gly—Gly— Phe—Leu 具类吗啡的镇痛作用 * 3.催产素与加压素 催产素:使子宫和乳腺平滑肌收缩，具有催产和使乳腺排乳的作用。 升压素:使血管平滑肌收缩 ，升高血压，并有减少排尿的作用，也称抗利尿激素。 * * 二.蛋白质的一级结构 P168 (Primary structure) （一）一级结构的内容 1.组成蛋白质的多肽链数目. ★2.多肽链的氨基酸顺序， 3.多肽链内或链间二硫 键的数目和位置。 * 1.样品必需纯（97%以上） 2.知道蛋白质的分子量 3.知道蛋白质由几个亚基组成 4.测定蛋白质的AA组成并根据分子量 计算每种AA的个数 5.测定水解液中的氨量计算酰胺的含量 （二）前提 * （三）.蛋白质的一级结构的测定 1.测定内容： * （1）测定多肽链的数目 （2）拆分多肽链。 （3）断裂链内二硫键。 * （4）分析多肽链的N末端和C末端。 * （5）测定多肽链的氨基酸组成。 * （6）多肽链部分裂解成肽段。 * （7）测定各个肽段的氨基酸顺序 * （8）确定肽段在多肽链中的顺序。 （9）确定多肽链中二硫键的位置 * 2.测定步骤 ①测定蛋白质分子中多肽链的数目：测定末端氨基酸残基的摩尔数与蛋白质 的相对分子量比较。 * ②多肽链的拆分： 尿素：8mol/L或 盐酸胍：6mol/L 处理，即可分开 多肽链(亚基). * ③二硫键的断裂： 8mol/L尿素或6mol/L 盐酸胍存在下: 过量的?-巯基乙醇还 原二硫键为巯基, 烷基化试剂保护巯基. * ★ 巯基的保护 * ④测定每条多肽链的氨基酸组成，并计算出氨基酸成分的分子比: 酸水解的同时辅以碱水解, 确定肽链中各种a.a出现的频率, * ⑤分析多肽链的N-末端和C-末端 末端氨基酸的测定：主要是N-端氨基酸分析法。 * N末端氨基酸测定的主要方法 P169 A.二硝基氟苯（DNFB）法：Sanger试剂，DNP-多肽，酸水解，黄色DNP-氨基酸，有机溶剂（乙酸乙酯）抽提分离、层析、鉴定。 B.丹磺酰氯法:在碱性条件下，丹磺酰氯（二甲氨基萘磺酰氯）可以与N-端氨基酸的游离氨基反应。检测灵敏度可以达到1?10-9mol。 * * C. Edman法（PITC法）： 逐步切下，无色PTH-氨基酸，有机溶剂抽提，层析。 D.氨肽酶法： 氨肽酶是一种肽链外切酶，从多肽链的N-端逐个的向里水解。根据不同的反应时间测出酶水解所释放出的氨基酸种类和数量，按反应时间和氨基酸残基释放量作动力学曲线，从而知道蛋白质的N-末端残基顺序。 * C端分析 A.肼解法: 多肽与无水肼NH2NH2 在100℃加热5-10h。C-端氨基酸从肽链上解离出来，其余的氨基酸则变成肼化物（氨基酸酰肼），肼化物能够与苯甲醛缩合成不溶于水的物质，而C端游离氨基酸留在上清液中。 * * B.羧肽酶法 羧肽酶是一种肽链外切酶，根据不同的反应 时间测出酶水解所释放出的氨基酸种类和数 量，从而知道蛋白质的C-末端残基顺序。 常用的四种羧肽酶：A,B,C和Y； 羧肽酶A、B： 不能处理末端为Pro的残基