药学毕业论文淫羊藿苷对骨髓增生异常综合征模型大鼠骨髓细胞凋亡的影响.doc

淫羊藿苷对骨髓增生异常综合征模型大鼠骨髓细胞凋亡的影响 【摘要】 　　目的探讨单味中药提取物淫羊藿苷对骨髓增生异常综合征（MDS）模型大鼠骨髓细胞凋亡的影响。方法通过复制骨髓增生异常综合征（MDS）大鼠模型，用淫羊藿苷溶液灌胃。实验结束后，检测大鼠外周血象、骨髓象，骨髓细胞总凋亡率。结果淫羊藿苷组外周血白细胞计数、血红蛋白含量、红细胞计数灵敏、血小板计数高于模型生理盐水组，且有显著差异(Plt;0.01)；各模型组大鼠外周血和骨髓均能见到不同程度的病态造血，骨髓细胞凋亡指数显著升高，与空白对照组相比有极显著差异；淫羊藿苷组骨髓细胞凋亡指数比模型生理盐水组低，两组间有极显著性差异(Plt;0.001)。结论 淫羊藿苷有升高MDS模型大鼠外周血象、改善骨髓病态造血、降低骨髓细胞凋亡率的作用。 【关键词】 骨髓增生异常综合征 淫羊藿苷 细胞凋亡 　　骨髓增生异常综合征(MDS)是一组起源于造血髓系定向干细胞或多能干细胞的异质性克隆性疾患，主要特征是无效造血、外周血细胞减少和有明显向急性白血病转化的倾向，是临床常见的难治性血液病，其发病率正逐年增高。MDS属祖国医学 “虚劳”“血证”“内伤发热”等范畴，国内从中医角度对MDS研究较多，对其病因病机、辨证论治、中药复方药效等方面都进行了研究，取得了一定的成绩。在治疗方面主要从补肾益髓、益气活血、清热解毒等方面用复方进行研究，国内报道以中药为主治疗MDS的总有效率为58.3%～89.47%［1～3］。本文作者拟通过动物实验研究，探讨单味中药提取物淫羊藿苷对MDS模型大鼠骨髓细胞凋亡的影响，从而筛选治疗MDS有效的中药，为淫羊藿苷的临床运用提供实验基础。 　　1 材料与方法 　　1.1 动物与药物 　　Wistar大鼠36只，体重80～100 g ，7周龄，清洁级，由贵阳医学院动物所提供〔合格证号：SCXK（黔）20020001〕。二甲基苯蒽(DMBA)由美国Sigma公司生产。FACS240型流式细胞仪（美国BD公司生产），OLYMPUS-BHB211显微镜（日本）。淫羊藿苷（由陕西慧科生物股份有限公司提供，批号，98%淫羊藿苷溶于0.9%生理盐水中制成3.0 mg/ml浓度的药液待用。 　　1.2 模型制备与实验分组取Wistar大鼠36只，随机分为3组，每组12只，分别为正常对照组、模型组生理盐水组和模型淫羊藿苷组。参照冯宝章等［4］的大鼠MDS造模方法于实验第0，7，14，21，28天按35 mg/kg剂量尾静脉注射溶于芝麻油、生理盐水的DMBA于模型组，建立MDS模型。从第2次注射DMBA后（即实验第14天）分别予生理盐水、淫羊藿苷溶液按0.2 ml/10 g体重剂量灌胃，1次/d，连续20次。 　　1.3 观察指标及检测方法观察实验中大鼠的精神活动状况、出血情况、皮毛光泽度、饮食饮水量、体重变化情况；实验结束后，尾静脉取血，参照《血液实验学》［5］方法进行人工计数外周血象，并将外周血涂片瑞氏染色后观察外周血病态造血情况；取股骨骨髓涂片，瑞士染色后观察骨髓增生情况及油镜下观察骨髓病态造血情况，用流式细胞仪按试剂盒说明检测骨髓细胞凋亡指数。 　　1.4 资料处理方法用SPSS系统软件进行数据处理，实验结果以±s表示，组间差采用t检验。 　　2 结果 　　2.1 一般情况比较自尾静脉注射两次DMBA起，模型组大鼠逐渐出现皮下紫癜，以嘴唇及双小腿较明显，第15天起逐渐出现精神萎靡、眯眼、扎堆、反应迟钝、行动迟缓，甚至行动不稳，毛色枯槁、散乱竖起，逐渐消瘦，正常对照组以上各方面都没有改变，体重增加。实验过程中除正常对照组外，其余两组均有大鼠死亡，生理盐水组死亡4只，模型淫羊藿苷组死亡3只。 　　2.2 淫羊藿苷对MDS模型大鼠外周血象的影响 淫羊藿苷有明显回升MDS模型大鼠外周血血象的作用，虽然与正常对照组比较淫羊藿苷组的血小板计数、红细胞计数、白细胞计数、血红蛋白含量有所降低，两组间有差异（P﹤0.05），但较模型生理盐水组明显升高，与模型生理盐水组比较有极显著差异（P﹤0.001）。结果见表1～2。表1 淫羊藿苷对MDS模型大鼠外周血血小板、白细胞的影响（略）表2 淫羊藿苷对MDS模型大鼠外周血血红蛋白、红细胞的影响（略） 　　2.3 淫羊藿苷对MDS模型大鼠外周血病态造血的影响各模型组外周血可见不同程度的病态造血，淫羊藿苷能一定程度上改善MDS模型大鼠外周血病态造血的情况，模型生理盐水组大鼠6只可见有核红细胞，3只见红细胞形态异常，大小不一，可见大红细胞，2只可见巨大血小板，巨核细胞颗粒减少。模型淫羊藿苷组中，3只可见有核红细胞、2只见红细胞形态异常，大小不一，可见大红细胞， 2只可见成熟粒细胞分叶过多，2只可见巨大血小板，巨核细胞颗粒减少。结果见表3。