脆性X综合征.ppt精选.pptVIP

PCR 法 RT - PCR 可检测FMR -mRNA，了解基因的表达情况。 将基因组DNA 先经甲基化敏感性酶充分酶切后再进行PCR 扩增。正常男性CpG 岛未甲基化，模板DNA 可被切割而检测不到PCR 产物，男性患者CpG 岛存在异常甲基化，故该位点不能被甲基化敏感性酶识别而扩增出一固定大小的PCR产物。此法能诊断男性患者，适用于对FraX 男性患者的确诊及群体筛查，但不能鉴别正常男性及NTMS，且这类个体基因组DNA 经上述酶切不完全时也可产生假阳性。为防止酶解不全造成假象，所有阳性标本均应用Southern印迹杂交进一步验证。 因女性有一条X 染色体本身就已存在甲基化，故不使用于女性标本的检测。PCR 法快速灵敏，使用于临床筛查及初步诊断。 脆性X的分子诊断 * 转录水平的检测 研究发现绝大多FraX 男性患者有FMR - 1 mRNA 表达，少数男性患者体内因CpG 岛不完全甲基化而有少量表达。通过Northern 印迹杂交、RT - PCR 等在对正常及前突变等位基因的研究中发现，二者在FMR - 1 mRNA 转录过程、表达水平及稳定性等方面极为相似，因而推测前突变携带者不表现临床症状可能与mRNA 转录水平正常密切相关。检测mRNA 水平有助于FraX 患者的诊断及表型的预测。 脆性X的分子诊断 * 蛋白水平的检测 典型男性患者细胞中完全缺乏FMRP。 由于前突变等位基因能正常转录，FMRP 表达多在正常范围内，因此仅适用于男性患者的诊断，不适合于前突变携带者的筛查。 脆性X的分子诊断 * 脆性X综合征STR位点连锁分析 DXS297 (VK23) DXS998 DXS548 (RS46) FRAXAC1 FRAXAC2 DXS1215 DXS8091 可用于家系连锁分析，追踪脆性X染色体的遗传轨迹。 * 谢 谢！ * 脆性X综合征 唐新华 云南省第一人民医院遗传诊断中心 * 脆性X综合征 脆性X综合征（Fragile X Syndrome）,又称Martin-Bell 综合征，是一种常见的导致家族性智力障碍的遗传病之一。 是仅次于唐氏综合征引起男性智力发育障碍的第二大主因。 发病率：男性中1/4000-9000 女性中1/7000-15000 致病基因定位：Xq27.3 * 脆性X综合征临床表现（男性） 智力发育落后 语言反复。。。 极度活跃或抑郁 方额，长脸 大耳朵 大下颌 大睾丸 * 女性脆性X携带者的临床表现 大约35-60%的女性携带者表现出轻度或重度的智力低下。 无纯合子报道。 * 脆性X综合征的诊断 临床症状 家系分析 检查： 普通外周血染色体检查、脆性X染色体检查、 分子生物学基因诊断、 * X染色体上与低智力相关的基因 * 脆性X综合征染色体检查 脆性位点是在特定的培养条件下，染色体上非随机出现的不着色的裂隙或断裂。 脆性位点总是恒定的出现在某一染色体的同一位置上，具有遗传性。 大部分比较常见的位点，不能作为遗传标记。在某些个体或家系中，会携带一些比较少见的染色体脆性部位，可视为遗传标记进行家系遗传分析。 Xq27 ～ q28 区域的脆性位点研究迄今发现的26种罕见脆性位点，只有Xq27 ～ q28 区域的脆性位点与遗传性疾病有关。 其它常染色体上的脆性位点尚未发现与某一疾病直接相关的。 * 脆性X综合征染色体检查 FraX 因与Xq27. 3 处叶酸敏感性脆性位点（FraXA）相关而命名。 在缺乏叶酸的培养环境中几乎所有的男性患者及约50% 的女性携带者可检测到该位点。 1990 年Sutherland 用特殊的诱导条件发现Xq27. 2 处有一个脆性位点：FraXD，并证明它是X 染色体上的一个正常结构。 1993 年Hirst 等证实在Xq27 ～ q28 区域的FraXE、FraXF 与人类智力低下有关，在细胞遗传学水平上不易与FraXA 位点鉴别。 这是细胞遗传学检查的缺点。需要分子生物学的检查来补充。 * 脆性X综合征染色体检查 Fra(X)(q27.3)在正常人的细胞中极少表达。 使用叶酸缺乏的培养基，或在培养基中加入抗叶酸的试剂（如trimethoprim甲氧苄胺嘧啶）,或者加入胸苷合成酶的抑制剂（如5’-氟尿嘧啶核苷FUdR或氨甲喋呤MTX），有时还加入咖啡因抑制DNA修复，均可以诱导Xq27.3脆性位点的表达。 * 脆性X综合征染色体检查方法文献来源：Human chromosomes principles and techiques, 作者Ram S. Verma/Arvind Babu 叶酸缺乏培养基诱导法： TC199培养基37℃中培养96小时，G-显带。碱性条件PH7.4-7.6，