最新siRNA抑制EMS1表达对MGC803细胞生长增殖的影响.pdfVIP

目 录 中文摘要1 英文摘要3 前 言5 材料与方法 9 结果17 讨论22 结 论26 参考文献27 综 述32 附录（主要英文缩略语索引）51 硕士期间发表的论文52 致 谢53 siRNA 抑制EMS1 表达对MGC803 细胞生长 增殖的影响 硕士研究生：梅 徽 导 师：谢海龙 副教授 中文摘要 目的：EMS1 基因是胃癌相关基因。本研究以EMS1 基因阳性表达的MGC803 细胞 为模型，采用siRNA 技术，抑制MGC803 细胞EMS1 基因表达，观察EMS1 基因表 达抑制对MGC803 细胞增殖的影响。 方法：构建针对EMS1基因的pSilencer3.1-EMS1-siRNA表达载体，经脂质体转染， 导入MGC803细胞，G418筛选，建立稳定的pSilencer3.1-EMS1-siRNA/MGC803细胞 系。Western blotting检测Cortactin表达。通过绘制生长曲线、流式细胞仪分 析，观察EMS1基因表达抑制后，MGC803细胞增殖速度、细胞周期分布变化。 结果：重组质粒DNA经测序鉴定，结果均证实pSilencer3.1- EMS1-siRNA表达载 体构建成功。将pSilencer3.1- EMS1-siRNA和pSilencer3.1质粒分别转染MGC803 细胞，G418筛选阳性细胞克隆，经Western blotting检测结果表明，成功建立了 EMS1基因表达下调的MGC803细胞系。直接计数法与MTT法绘制的细胞生长曲线结 果均显示：pSilencer3.1-EMS1-siRNA/MGC803细胞与pSilencer3.1/MGC803细胞 和MGC803细胞生长速度无明显差异 （P0.05）；流式细胞仪检测上述三组细胞周 期分布及凋亡情况，结果显示：转EMS1-siRNA的MGC803细胞与两对照组相比，差 异无显著性意义(P0.05)，提示EMS1基因在MGC803细胞中表达下调对细胞周期分 布及凋亡无明显影响。 结论：（1）构建了pSilencer3.1-EMS1-siRNA真核表达载体； （2）建立了EMS1 基因表达下调的pSilencer3.1-EMS1-siRNA/ MGC803 细 胞系； 1 （3）siRNA 抑制EMS1 基因表达不影响MGC803 细胞增殖。 关键词：siRNA；EMS1基因；MGC803细胞；细胞增殖 2 Effect of EMS1-siRNA on the growth in MGC803 cell line Abstract Objective EMS1 gene is a related gene of gastric cancer . MGC803 cell line was selected as a target with positive expression of EMS1 gene and observed the proliferation effect after EMS1 gene expression inhibited by siRNA. Methods pSilencer3.1-EMS1-siRNA expression vector targeting EMS1 gene was constructed and transfected into MGC803 cell line by cationic liposome.The stable pSilencer3.1-EMS1-siRNA/MGC803 cell line was obtained by G418 selection.T