aCella#8482; - AChE 乙酰胆碱酯酶检测试剂盒在Modulus 微孔板多功能光度计 ....pdf

Turner BioSystems Applications Note aCella™ - AChE 乙酰胆碱酯酶检测试剂盒 在 Modulus 微孔板多功能光度计上的应用 1.应用说明 Turner 公司 Modulus 微孔板多功能光度计和 aCella™ - AChE 试剂盒联合使用为检测乙酰胆碱酯酶 提供了一种简便、快速、灵敏的检测方案。乙酰胆碱参与神经递质过程，在下一次神经冲动开始前乙酰 胆碱会被 AChE 降解掉。AChE 会被神经内毒素和杀虫剂所抑制，由于神经内毒素和杀虫剂对人和动物 的严重毒副作用而成为很多科学家所关注的一个领域。另外，在一些疾病治疗过程中，研究人员也对 AChE 抑制剂可能产生的功能进行了研究，例如在 Alzheimers 疾病中。 Cell Technology 公司 AChE 活性检测试剂盒使用乙酰胆碱经过一系列酶促反应，在发光反应中快速 地将反应中活性 AChE 的量以光信号形式输出。样品中的AChE 抑制剂的存在使得样品中 ATP 水平升 高，这可以通过发光来定量。 Modulus 微孔板多功能光度计采用独特的发光检测系统在 aCella – AchE 试剂盒检测中能达到最高灵 敏度和最宽线性范围。样品/抑制剂可以用 PBS、试剂级的去离子水或者Tris 缓冲液配制。可以通过连 续稀释样品来测量抑制剂的抑制能力。所有的检测都使用 aCella – AchE 检测试剂盒(Cell Technology, Inc. Catalog # CLACHE 100-2)。 图 1 Tacrine （AChE 的混合抑制剂）在去离子水中通过系列稀释。10ul Tacrine 稀释液和 50ul 的试 剂 A (Ach 酶)一起加入不透明的 96 孔白板中（X 轴表示 Tacrine 终浓度 单位 mM）。样品孵育 5min 后，所有孔中加入 50ul 试剂 B，发光检测仪收集数据，图中数据是加入试剂 B 2min 后的检测数据 北京原平皓生物技术有限公司 电话: 010803 传真: 010 E-mail: order@ Web: Turner BioSystems Applications Note 图 2 Malathion 常用杀虫剂，先用二甲基亚砜稀释，而后在去离子水中系列稀释。10ul Tacrine 稀释 液和 50ul 的试剂A (Ach 酶)一起加入不透明的 96 孔白板中（X 轴表示 Tacrine 终浓度 单位 uM）， 混合样品孵育 15min 后所有孔中加入 50ul 试剂 B，发光检测仪收集数据，图中数据是加入试剂 B 2.5min 后收集的数据。 2.所需器材 • Modulus 微孔板多功能光度计(P/N 9300-001 或 9300-002，9300-003) • 不透明白色 96 孔板(EK Scientific EK-25075) • Cell Technology 公司 aCella-AChE 检测试剂盒(Cell Technology, CLACHE 100-2) • p20, p200 移液器和枪头。 3. 实验方案 3.1 试剂制备 试剂 A：使用产品提供的试剂，含有AChE 酶 试剂 B：使用产品提供的试剂，含有检测试剂、乙酰胆碱和激酶。 试剂 C：使用产品提供的试剂，调节体系使得发光测量值最大。 注：避光溶解以上三种试剂，检测前室温平衡。分装到小瓶中，-70°C 保存。避免反复冻融！ 3.2 仪器安装 3.2.1 运行软件。 3.2.2 在对话框中点击Create New Protocol 3.2.3 当有新方案生成提示时，选择0 injectors 北京原平皓生物技术有限公司 电话: 010803 传真: 010 E-mail: order@ Web: Turner BioSystems Applications Note 3.2.4 首次运行前修改延迟时间，测量次数和两次测量间的延迟时间，Integration time选择为 1s。 3.2.5 接着选择要测量的孔，可以选择Save protocol as以备将来