动物细胞培养医学课件.pptVIP

1.动物细胞培养的发展史2.动物细胞的特征3.培养基4.动物细胞的获得与保存5.动物细胞培养方法6.动物细胞培养生物反应器7.动物细胞培养过程参数的控制与检测 动物细胞培养的发展史 动物细胞培养的发展史 动物细胞培养的发展史 动物细胞培养的发展史 动物细胞的特征 1.结构特征 动物细胞的特征 细胞膜 动物细胞的特征 2.动物细胞的代谢特征 在其培养过程中，葡萄糖和谷氨酸为主要营养物质，乳酸和氨是主要的代谢副产物 动物细胞的特征 动物细胞的特征 动物细胞的特征 动物细胞的特征 培养基 培养基 1.天然培养基 培养基 2.合成培养基 培养基 成分 培养基 培养基 培养基 培养基 动物细胞系的获得与保存 动物细胞培养方法 动物细胞培养方法 动物细胞培养生物反应器 动物细胞培养生物反应器 动物细胞培养生物反应器 动物细胞培养过程参数的控制与检测 动物细胞的细胞膜直接与外界接触，所以外界环境对气的影响还是很大的，这样就需要对一些过程进行参数的控制，使其正常生长和产物的表达。 主要因素有：温度 溶解氧 PH 渗透压 * 动物细胞培养 1、动物细胞培养技术的建立 1907年，Harrison首先培养了蛙胚神经管区细胞，并观察到从中长出的轴突细胞（神经纤维），他的工作被认为是动物细胞培养开始的标志； 1911年，Carrel发现了鸡胚浸出液对于培养细胞的生长促进作用，并首次把无菌技术引入组织培养技术中。 1914年，Thomson建立了器官培养技术。 1940年，1951年，Earle和Gay分别建立了c3H小鼠结缔组织细胞系的L系和人体细胞系－人体宫颈癌Hela细胞系。 2、细胞融合现象的发现 19世纪30年代，Muller, Schwann, Virchow等相继在肺结核、天花、水痘、麻疹等病理组织中观察到多核细胞现象； 1849年Lobing在骨髓中也发现了多核现象的存在； 1855年～1858年，科学家们在肺组织和各种正常组织及发尖和坏死部位都发现了多核细胞； 1859年，A. Barli在研究黏虫的生活史时发现，某些黏虫存在着由单个细胞核融合形成多核的原生质团的情况。 据此，他认为多核细胞是由单个细胞彼此融合而形成的。至此，自然界中广泛存在着多核细胞的事实，才被生命科学工作者接受。 3、细胞融合技术的建立和杂交瘤技术的诞生 1958年, Okada发现紫外灭活仙台病毒可引起艾氏腹水瘤细胞彼此融合。 60年代，Harris(1965)诱导不同动物体细胞融合获得成功并培养存活。 1975年，免疫学家Kohler和Milstein利用仙台病毒诱导绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合，选择到能分泌单一抗体的杂种细胞。该杂种细胞具有在小鼠体内和体外培养条件下大量繁殖的能力，并能长期地分泌单克隆抗体，从而建立了小鼠淋巴细胞杂交瘤技术。 4、动物克隆技术的建立 首例克隆动物成功的报道是在1962年，英国学者Grudon把非洲爪蟾小肠上皮细胞的核注入同种或异种非洲爪蟾未受精卵(经紫外线照射杀死卵细胞核)中，约有1％的重组卵发育成为成熟蛙。 这一成功开创了由体细胞培育动物个体的新型实验途径，其贡献在于：实验证明了完全分化的肠细胞仍然具有未分化细胞的全部遗传信息，并能在一定的条件下发育成动物个体，从而证明了动物细胞仍然具有全能性；初步建立了体细胞核移植的实验体系，证明在体细胞核转至胚胎发育方向的早期，卵细胞质对体细胞核的发育功能起着关键性的调节作用，其作用因子可能是细胞质中的mRNA与有关的蛋白质。 与微生物相比，动物细胞体积较大，对环境因素敏感，营养需求高，倍增时间长，没有细胞壁但对损伤更敏感。 葡萄糖的代谢途径 在人体内，葡萄糖代谢除了无氧酵解途径以外还有很多其他方式，比如有氧氧化、磷酸戊糖途径、糖原的合成与分解途径、糖异生、糖醛酸途径等。 （一）糖的有氧氧化途径： 1.概念：葡萄糖在有氧条件下彻底氧化成水和二氧化碳的过程 2.过程 有氧氧化可分为两个阶段： 第一阶段：胞液反应阶段：从葡萄糖到丙酮酸，反应过程同糖酵解。 糖酵解产物NADH不用于还原丙酮酸生成乳酸，二者进入线粒体氧化。 第二阶段：线粒体中的反应阶段： （1）丙酮酸经丙酮酸脱氢酶复合体氧化脱羧生成乙酰CoA，是关键性的不可逆反应。其特征是丙酮酸氧化释放的能量以高能硫酯键的形式储存于乙酰CoA中，这是进入三羧酸循环的开端。 （2）三羧酸循环：三羧酸循环是在线粒体内进行的一系列酶促连续反应，从乙酰CoA和草酰乙酸缩合成