试验神经科学试验讲义 王元身.docVIP

实验神经学实习资料 Ⅰ、常用试剂的配制和常用动物简介： 一、常用缓冲液 1. 0.1M磷酸缓冲液 0.1M Na2HPO4·12H2O 17.9g/500ml 0.1M NaH2PO4·2H2O 7.8g/500ml PH 0.1M Na2HPO4 0.1M NaH2PO4 7.02 34ml 16ml 7.14 37ml 13ml 7.3 40ml 10ml 7.4 47.5ml 2.5ml 2. 0.2M醋酸缓冲液 0.2M 无水醋酸钠 8.2g/500ml 0.2M 醋酸 6ml/500ml pH 0.2M HAC 0.2M NaAC 3.3 48.0 2.0 5.0 14.8 35.2 3. 10%缓冲中性formalin固定液 PH7.3 0.1M 磷酸缓冲液 900ml 37~40% 甲醛 100ml 4. 4%多聚甲醛固定液 0.1M Na2HPO4 800ml 多聚甲醛(PFA) 40g 0.1M NaH2PO4 200ml 5. 铬明胶粘片液 明胶 5g (1g) 60℃水浴加热溶解→加入 硫酸铬钾 0.5g (0.1g) 硫酸铬钾→过滤→ DW 1000ml (200ml) 60℃水浴粘片→60℃烤干 6. 玻璃器皿清洗液 稀（一般实验用） 中（分子生物学实验用） 浓（细胞培养用） 重铬酸钾 300g 100g 40g 硫酸 300ml 250ml 200ml 蒸馏水 300ml 750ml 200ml 二、1. 大鼠： 纯种 体长：尾长 头 耳间距 SD系(Sprague-Daurley) 3:2 短宽 大 Wistar系 1:1 细长 小 大白鼠共57-61椎骨 脊N34对 C8 T13 L6 S4 Cy3 椎式 C7 T13 L6 S4 Cy27-31 剥离鼠脑时注意应从颈部椎骨开始，咬骨钳尖向上慢慢剥离椎骨、颅骨；大、小脑间的骨膜要剥离；小脑绒球、嗅球易损伤；硬脑膜不要碰破；取脑时先剪开硬脑膜，再剪断颅底三叉N，视N，嗅丝，慢慢取出鼠脑。应小心剥离。 2. 家兔(Rabbit) 中国本兔：嘴较尖，耳短厚，白色，红眼，抗病力较弱 青紫兰兔(金基拉兔)：毛色灰，抗病力较强，毛从根到尖部分五种颜色为：石盘兰、乳白色、珠灰色、雪白色、黑色 大耳白兔（日本大白兔）：毛色纯白、耳大、红眼 兔脊神经37对，C8、T12(13)、L7(8)、S4、Cy6 椎式：C7 T12 L7 S4 Cy11-15 3. 恒河猴(Rhesus Monkey) 又称孟加拉国猴，广西猴 脊神经31对C8、T12、L5、S5、Cy1 椎式：C7 T12 L5 S4 Cy5 体重：14~15kg 体长：55~62cm 尾长：22~24cm 体重：9~10kg 体长：40~45cm 尾长：18~24cm Ⅱ、神经组织的一般制片技术 一、石蜡切片的制片程序（分步程序） 1. 组织处理 组织取材；(2) 组织修整；(3) 组织固定；(4) 组织冲洗 2. 组织包埋 组织脱水；(2) 组织透明；(3) 组织浸蜡；(4) 组织包埋 3. 组织切片 蜡块修整；(2) 蜡块固贴；(3) 蜡块切片；(4) 切片附贴；(5) 切片烤干； 4. 组织染色 (1)切片脱蜡到水；(2)切片染色；(3)切片脱水上行；(4)切片透明；(5)切片封固 二、组织处理： 1. 组织取材： (1) 动物处理： ① 药品物麻醉：小白鼠：乙醚 大白鼠 、猫、兔、狗：1%戊巴比妥钠 6%水合氯醛 5ml/kg体重 20%乌拉坦 大、小白鼠、猴等腹腔注射 兔：耳 ② 空气栓塞法： (2) 材料的选择： 神经系统取材，一般用猫：大脑：锥体细胞 小脑：梨形细胞 壁虎肌肉：运动终板 (3)取材： 要求：①组织越新鲜越好； ②注意取材的部位和方向； 梨形细胞取猫小脑蚓体正中矢状切面；脊髓切片，应取其典型的代表部位，猫脊髓：颈Ⅳ、胸Ⅴ、腰Ⅴ、骶Ⅱ ③取材器械锋利、专用； ④取材动作轻柔，避免组织损伤，清除不必要及机械损伤的组织。 2. 组织修整： 核对组织块，登记，编