山东省邹城市第一中学2017学年选修三基因工程的基本操作程序46PPT.ppt

（1）农杆菌转化法 ①特点： 易感染双子叶植物和裸子植物，对大多数单子叶植物没有感染能力 ②原理： Ti质粒上的T-DNA可以转移到受体细胞，并整合到受体细胞染色体的DNA上。 ③转化过程: Ti质粒 目的基因 构建 表达载体 导入 植物细胞 插入 植物细胞染色DNA 表达 新性状 转入 农杆菌 （2）基因枪法： 利用压缩气体产生的动力 ，将包裹在金属粒表面的表达载体DNA打入受体细胞中，使目的基因与其整合并表达的方法 ①操作方法： ②金属粒： 将目的基因导入单子叶植物细胞 钨粉粒子和金粉粒子，粒子的直径一般在0.6～4um 。 ③适用：单子叶植物(成本较高) 基因枪法： （3）花粉管通道法： ①操作方法： ②特点： 在植物花受粉后，花粉形成花粉管还末愈合前，剪去柱头，然后，滴入DNA（含目的基因）使目的基因借助花粉管通道进入受体细胞 十分简便经济，我国科学家独创的一种方法 ③例： 转基因抗虫棉 适用于被子植物 胚珠 花药 花丝 柱头 花柱 子房壁 子房 雄蕊 雌蕊 温故知新： 1.什么是基因工程？ 2.DNA重组技术的基本工具有哪些？ 3.运载体需要具备哪些条件？ 1.2基因工程的基本操作程序 一.目的基因的获取 二.基因表达载体的构建 三.将目的基因导入受体细胞 四.目的基因的检测与鉴定 一、目的基因的获取 目的基因：主要指的是编码蛋白质的结构基因，也可以是一些具有调控作用的因子。 思考：目的基因的获取方法有哪些？ 获取方法： 1.从基因文库中获取目的基因； 2.利用PCR技术扩增目的基因； 3.人工合成 1.从基因文库中获取目的基因 阅读课本P9-10讨论：什么叫基因文库？如何构建基因文库？ 基因文库 基因组文库 部分基因文库 （cDNA文库） 将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入到受体菌的群体中储存，每个受体菌含有这种生物的不同基因，这样的受体菌群就称为基因文库。 基因组DNA文库 cDNA文库 基因组DNA文库和cDNA文库的构建 基因组文库和部分基因文库的比较 文库类型 cDNA文库 基因组文库 文库大小 基因中启动子 基因中内含子 基因多少 物种间基因交流 小 大 无 有 无 有 某种生物的部分基因 某种生物的全部基因 可以 部分基因可以 补：原核细胞的基因结构 非编码区 非编码区 编码区 编码区上游 编码区下游 与RNA聚合酶结合位点 启动子 终止子 RNA聚合酶能够识别调控序列中的结合位点，并与其结合启动转录过程。 真核细胞的基因结构 编码区 非编码区 非编码区 与RNA聚合酶 结合位点 内含子 外显子 能够编码蛋白质的序列叫做外显子 不能够编码蛋白质的序列叫做内含子 启动子 终止子 编码区上游 编码区下游 内含子： 外显子： 结构基因 外显子 内含子 转录、加工修饰 mRNA 基因组文库和部分基因文库的比较 文库类型 cDNA文库 基因组文库 文库大小 基因中启动子 基因中内含子 基因多少 物种间基因交流 小 大 无 有 无 有 某种生物的部分基因 某种生物的全部基因 可以 部分基因可以 基因组文库与部分基因文库的关系 思考：如何从基因文库中获取我们所需要答案目的基因呢？ 提示：根据基因的有关信息，如基因的核苷酸序列、基因在染色体上的位置、基因的表达产物、基因的功能等． 例.(2014·新课标全国卷Ⅱ)植物甲具有极强的耐旱性，其耐旱性与某个基因有关，若从该植物中获得该耐旱基因，并将其转移到耐旱性低的植物乙中，有可能提高后者的耐旱性。回答下列问题：(1)理论上，基因组文库含有生物的　　　　基因；而cDNA文库含有生物的　　　　基因。 (2)若要从植物甲中获得耐旱基因，可首先建立该植物的基因组文库，再从中　　　　出所需的耐旱基因。 全部 部分 筛选 2.利用PCR技术扩增目的基因 讨论： 1.PCR技术的原理是什么？ 　 2.PCR技术扩增的过程如何进行的？ 概念：PCR全称为_______________，是一项 在生物____复制___________的核酸合成技术。 前提条件：_______________________； 复制条件：___________、___________ 、 __________________、 ________________。 原理：__________ 方式：以_____方式扩增，即____（n为扩增循环的次数） 结果： 多聚酶链式反应 体外 特定DNA片段 DNA复制 已知基因的核苷酸序列 四种脱氧核苷酸 DNA引物 热稳定DNA聚合酶 指数 2n 使目的基因的片段在短时间