湖南省长沙市长郡卫星远程学校2013-2014学年高二下学期生物《选修一_专题三_课题2_月季的花药培养+专题五_课题1_DNA的粗提取与鉴定》课件.pptVIP

月季的花药培养 DNA的粗提取与鉴定 　　在NaCl溶液浓度低于0.14 mol/L时，DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而逐渐降低; 在0.14 mol/L时，DNA溶解度最小；当NaCl溶液浓度继续增加时，DNA的溶解度又逐渐增大。 基础知识 0 溶解度 NaCl浓度 0.14mol/L 2mol/L 〖思考1〗DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度有何特点？ 基础知识 0 溶解度 NaCl浓度 0.14mol/L 2mol/L 〖思考2〗要使DNA溶解，需要使用什么浓度？要使DNA析出，又需要使用什么浓度？ 　　2mol/L浓度可使DNA溶解； 　　0.14mol/L浓度可使DNA析出。 基础知识 0 溶解度 NaCl浓度 0.14mol/L 2mol/L 〖思考2〗要使DNA溶解，需要使用什么浓度？要使DNA析出，又需要使用什么浓度？ 基础知识 〖思考3〗 酒精是一种常用有机溶剂，但DNA却不能溶于酒精（特别是95％冷却酒精），但细胞中蛋白质可溶于酒精。问：采用DNA不溶于酒精的原理，可以达到什么目的？ 将DNA和蛋白质进一步分离 基础知识 〖思考3〗 酒精是一种常用有机溶剂，但DNA却不能溶于酒精（特别是95％冷却酒精），但细胞中蛋白质可溶于酒精。问：采用DNA不溶于酒精的原理，可以达到什么目的？ DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性 ①蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响 ②大多数蛋白质不能忍受60－80℃的高温，而DNA在80℃以上才会变性 ③洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜，去除脂质和蛋白质，但对DNA没有影响 基础知识 〖思考4〗 提取DNA还可以利用DNA对酶、高温和洗涤剂耐受性原理。利用该原理时，应选用怎样的酶和怎样的温度值？ 　　蛋白酶，因为酶具有专一性，蛋白酶只水解蛋白质而不会对DNA产生影响。温度值为60～80℃，因为该温度值蛋白质变性沉淀，而DNA不会变性。 基础知识 〖思考4〗 提取DNA还可以利用DNA对酶、高温和洗涤剂耐受性原理。利用该原理时，应选用怎样的酶和怎样的温度值？ DNA的鉴定 基础知识 DNA的鉴定 基础知识 ①DNA与二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。 ①DNA与二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。 ②能否使用甲基绿（绿色）鉴定DNA？ 基础知识 DNA的鉴定 　　通过利用不同浓度NaCl溶液溶解或析出DNA，可以从细胞中提取DNA；再利用酒精进一步将DNA与蛋白质分离开来，达到提纯的目的；最后利用二苯胺试剂鉴定提取的物质是否是DNA。 原理总结 实验设计 （一）实验材料的选取 　　不同生物的组织中DNA含量不同。在选取材料时，应本着DNA含量高、材料易得、便于提取的原则。你认为教材提供的材料中哪些不适合提取DNA？ 实验设计 哺乳动物血液和液体培养基中大肠杆菌。 （一）实验材料的选取 　　不同生物的组织中DNA含量不同。在选取材料时，应本着DNA含量高、材料易得、便于提取的原则。你认为教材提供的材料中哪些不适合提取DNA？ 实验设计 （一）实验材料的选取 　　从核DNA数目来看，猪38条，鸡78条，哺乳动物血0条，猕猴桃58条，洋葱16条，豌豆14条，菠菜12条，大肠杆菌1条。请选择动植物材料各一种。 实验设计 鸡血、猕猴桃。 （一）实验材料的选取 　　从核DNA数目来看，猪38条，鸡78条，哺乳动物血0条，猕猴桃58条，洋葱16条，豌豆14条，菠菜12条，大肠杆菌1条。请选择动植物材料各一种。 （二）破碎细胞，获取含DNA的滤液 1.动物细胞 　　动物细胞的破碎较易，例如，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可。 （二）破碎细胞，获取含DNA的滤液 1.动物细胞 讨论 为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？ 讨论 为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？ 　　答：蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，再加上搅拌的机械作用，就加速了鸡血细胞的破裂（细胞膜和核膜的破裂），从而释放出DNA。 2. 植物细胞 ①植物细胞需要先用一定的洗涤剂和食盐溶解细胞膜 2. 植物细胞 讨论 加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？ 讨论 加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？ 　　答：洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA的释放；食盐的主要成分是NaCl，有利于DNA的溶解。 ①植物细胞需要先用一定的洗涤剂和食盐溶解细胞膜 2. 植物细胞 ②实例：　　提取洋葱DNA时，在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和食盐，进行充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液 2014年上学期 湖南长郡卫星远程学校 制作 1