第五章抗植物细菌病害基因及其.pptVIP

第五章 抗植物细菌病害基因及其应用 第一节 抗菌肽与溶菌酶和Attacins 第二节 病原相关蛋白基因及其应用 * * 抗菌肽是以昆虫抗菌肽为代表的一类具有抗菌作用的小分子肽。自1989年Boman从天蚕的免疫血淋巴中发现了第1种抗菌肽——天蚕素(cecropins)以来,在昆虫中已发现了大量的抗细菌肽、抗真菌肽以及既抗细菌又抗真菌的抗菌肽,约有100多种。 一、抗菌肽（Antibacterial peptides） 近年来有研究表明低等动物和哺乳动物在长期的进化过程中也选择了多种小分子物质(如抗菌肽)来作为自身的防御物质。目前已在青蛙皮肤中发现了magainin、bombinins、brevinins等,在亚洲蟾蜍中分离到BLP(Bombinina-Like-Peptide),在猪小肠中发现天蚕素类似物Cecp以及在鼠类组织和人的皮肤中发现了小分子的抗菌肽。此外,在大肠杆菌、乳酸菌和革兰氏阴性菌中也发现了Microcins、Lantibiotics及Lactococcin等几十种细菌来源的抗菌肽。西班牙学者J.Lacadena又在巨大曲霉的分泌物中发现了抗真菌肽(AFP)。因此,抗菌肽被认为是从细菌到高等哺乳动物普遍存在的一类防御性多肽,对生物的天然免疫起关键作用。由于其具有抗细菌、真菌、疟原虫及抑杀病毒,并对肿瘤细胞和癌细胞有明显的杀伤作用而对正常真核细胞不起作用的特点,因而在新药开发和植物抗病育种上有着良好的发展前景。 Top left: magainin 2, PDB entry 2MAG; Top right: lactoferricin B, PDB entry 1LFC; Bottom left: Nk_Lysin, PDB entry 1NKL; Bottom right: indolicidin, PDB entry 1G89.  /AP/main.html 1.　抗菌肽的分子结构和生物学效应　 目前已确定了20几种抗菌肽的一级结构,发现来自不同物种的抗菌肽一级结构有着不少相似之处:肽的N端富含亲水的氨基酸残基,特别是碱性氨基酸如赖氨酸、精氨酸,而C端则含较多的疏水残基,且末端均酰胺化。C端的酰胺化对抗菌肽的广谱抗菌极为重要。在肽的许多特定位置有一些保守的残基,有些位置尽管残基不同,但仍是保守替换。 来自不同目或种的昆虫抗菌肽,其一级结构中构成分子的氨基酸序列高度同源。根据它们的氨基酸组成和结构特征又可分为4类,即天蚕素类(cecropins),昆虫防御素(insect defensins),富含脯氨酸的抗菌肽和富含甘氨酸的抗菌肽。 二级结构分为4种类型,即?折叠(含2～3个由二硫键稳定的? 链)、两性?螺旋、扩展片层和环状结构。 三维构象可归纳为两种,即由疏水面和极性阳离子面相对而成的两性结构和由正电荷区支托疏水核心组成的翅状结构。 迄今为止从不同生物体内诱导的抗菌肽已不下200种,仅从昆虫体内分离获得的就多达170余种。根据抗菌肽的结构,可将其分为5类: (1)单链无半胱氨酸(Cys)的抗菌肽,或由无规则卷曲连接的两段?-螺旋组成的肽。该类包括天蚕素Cecropin, Magainins等。 Magainins最初是从非洲爪蟾的皮肤中发现的,它是爪蟾的皮肤在一定的环境压力下分泌出的抗感染和促进伤口愈合的成分,由两个紧密相连的肽链组成,每一个肽链有23个氨基酸,低浓度便可抑制许多细菌和真菌生长。 (2)富含某些氨基酸残基但不含Cys的抗菌肽。如富含脯氨酸(Pro)或甘氨酸(Gly)残基的抗菌肽。如从猪肠内分离的抗菌肽PR39中Pro含量占49%。鞘翅肽Coleoptericin和半翅肽Hemiptericin的全序中富含Gly。 Magainin porcine (3)含一个二硫键的抗菌肽,该二硫键的位置通常在肽链Ｃ端。如爪蟾皮肤细胞中产生的Brevinin。 (4)有两个或两个以上二硫键,具有β 折叠结构的抗菌肽。如绿蝇防御素(Phormin defensin),分子内有6个Ｃｙｓ形成3个分子内二硫键,肽链Ｃ末段是带有拟β 转角的反向平行的β片层。实验证明,分子中的二硫键在其抗菌作用中至关重要。 (5)由其他已知功能较大的多肽衍生而来的具有抗菌活力的肽。 2　抗菌肽的作用机制 　 尽管关于抗菌肽的作用机理已研究得较多,但目前对其机理仍未明了。现行的抗菌肽作用模型认为抗菌肽通过在细胞膜上形成离子通道造成内容物大量外泄而致使细胞死亡。Christeson等认为,抗菌肽首先通过静电作用被吸引到膜表面,然后疏水尾部插入细胞膜中的疏水区域,通过改变膜构象,多个抗菌肽聚合在膜上形成离子通道,造成物质泄露和细胞死亡。 Fink等认为