TAT蛋白介导锰一超氧化物歧化酶(Mn—SOD).pdfVIP

NervousDiseasesandMenta1Health，2007，Vo1．7，No．1 · 学 术 交 流 · TAT蛋 白介导锰一超氧化物歧化酶 (Mn—SOD) 可行性研究 贾栋 高国栋 【摘要】 目的 探 究TAT蛋 白介导锰一超氧化物歧化酶(Mn—SOD)的可行性 。方法 建立插入 TATPTDDNA序列的表达栽体 pT7460，将锰一超氧化物歧化酶 (Mn—SOD)基 因融合进入载体 pT7460。应用层析方法提纯融合蛋 白并用电泳分析 。结果 锰一超氧化物歧化酶 (Mn—SOD)与 TAT 的融合蛋 白表达在包涵体 内。结论 锰一超氧化物歧化酶(Mn—s0D)可与 TAT形成融合蛋 白。 【关键词】 TAT蛋 白； 锰一超氧化物歧化酶 ； 介导 StudyonthepossibilityofTATproteinmediatingMn--SOD jlA Dong，GAOGuo—dong． DepartmentofNeurosurgery．TangduHospital，FourthMilitaryMedicalUniversity，Ⅺ ’an710038， (Ynina 、 [Abstract] 0bjective TostudythepossibilitythatTATproteincanfusewithMn—S()D (super— oxidedismutase) ．Methods A expression vector ，named PT7460，wasconstructedby insertingthe TAT PTD DNA sequence。andaM n—S0D (superoxidedismutase)genewasfusedintothevector．The resultingproteinwaspurifiedbyaffinitychromatographyandanalyzedbyelectrophoresis．Results The TAT— Mn—SOD fusionproteinwasexpressedintheE．COLIER2566．Mostofthem waspresentedin theinclusionbody．Conclusions TheM n—S0D proteincouldbefusedwithTAT protein． [Keywords] TAT protein； Mn—S0D； Mediate 中图分类号 ：R741 文献标识码 ：A 文章编号 ：1009—6574(2007)01—0018—03 在研究 中，人们发现一些蛋 白质有被细胞 吸收 GCGAC(汀1r] CGAO0G 一3’ 的能力，经过进一步的研究 ，发现这些蛋 白质中有 蛋 把 2条寡核昔酸链退火得到的双链 DNA 片段 白质 转 导 结 构 域 (protein transduction domain， 插人到 pT7450载体 的NdeI和 EcoRI位点之间，得 PTD)，当把这些 PTD与其他蛋 白质嵌和表达时，这 到 的载体命名为 pT7460，酶切检测后 ，测序检验 。 些蛋 白质 也具有类似进入细胞 的能力。HIV TAT 1．2．2 pT7460一SOD载体 以及负对照的pT7460一 是 目前研究较多的这类蛋 白质序列之一 ，它可以介 nSOD载体的构建 从 p35s—SOD载体里扩增 SOD 导多种蛋白质进入不 同的细胞 内It]。Mn—SOD广 基 因，PCR反应 正向引物为：5’一TGGGCCAAGG— 泛存在于各类生物体 内，能催化生物体 内超氧 自由 GAGATGTTAC一 3’；反 向引物 为：5’一TCTT— 基 (O。一)发生歧化反应，是机体内(O。一)的天然消除 GCTGGGATCATTAGGG一3’。反应条件为 ：94℃ 剂