第3章A转录.pdfVIP

第三章 转录和转录后加工 1957年 Crick提出了中心法测(central dogma) DNA → RNA→ 蛋白质 1970 Crick又作了部分修改： DNA RNA 蛋白质 The central dogma 第一节 信使的发现 1955年Brachet用洋葱根尖和变形虫进行 实验： 若加入RNA酶，则蛋白质合成就停止； 若再加入酵母的RNA ，又可合成蛋白质。 这表明什么？ 同年Goldstein和Plaut用同位素标记变形 虫RNA前体，发现标记的RNA在核内； 标记追踪实验：经过一段时间发现被标 记的RNA在细胞质中； 这表明什么？ 1956年E. Volkin和 L.Astrachan ： 用同位素脉冲-追踪标记，发现T2噬菌体 新合成的RNA 的碱基比和它的DNA碱基比 相似，而和细菌的碱基比不同。由于T2感 染细菌时注入的是DNA ，而在细胞里合成 的是RNA 这表明什么？ DNA-RNA杂交实验 （Hall.B.D Spiegeman, S) 将T2噬菌体感染E.coli 后产生的RNA分 离出来，分别与T2和E.coli 的DNA进行分 子杂交，结果这种RNA只能和T2 的DNA 形成“杂种”链，而不能和E.coli 的DNA进 行杂交。 Jacob和Monod预言: （1）这种“ 信使”应是一个多核苷酸； （2 ）其分子平均不小于5×105bp ，足以携 带一个基因的遗传信息； （3 ）它们至少是暂时连在核糖体上； （4 ）其碱基组成反映了DNA 的序列； （5 ）它们能高速更新。 Jacob 和 Monod 将它定名为 : 信使 RNA （Messenger RNA ）或mRNA。 第二节 RNA的酶促合成 一. RNA合成的基本特点 1960 年 Weiss, SB. 等 发 现 RNA 聚 合 酶 （ RNA pol ）； 其特点是： （1）以核糖核苷三磷酸（rNTP ）为底物； （2 ）以DNA为模板； （3 ）按5 ′-3 ′方向合成； （4 ）无需引物的存在能单独起始链的合成； （5 ）第一个引入的rNTP是以三磷酸形式存在； （6 ）在体内DNA双链中仅一条链作为模板； （7 ）RNA 的序列和模板是互补的。 确定有义链 1963年，J.Marmur和Doty Spiegelnan 区分 有义链。 采用枯草杆菌的SP8噬菌体为材料，SP8 DNA 双链有“ 轻”、“ 重”，差异明显。 现在将作为转录模板的DNA单链称为模板 链或反义链 （antisense strand ）；非模板链 称为有义链 （sense strand ）或编码链。 在体外DNA 的两条链都可作为RNA合成的 模板。 SP8 DNA 变性 (100 °C) CsCl 密度梯度离心 L 链 H 链 分离 H 和 L 链 + 和 RNA 杂交 + 32P 标记