细胞培养 20130529.pptVIP

细胞培养 张 琴 2013029 是指用机械或化学的方法将组织分散成单个细胞后， 选用最佳生存条件对活细胞进行培养和研究的技术。 细胞培养的基本概念 One serial passage or doubling of cells 优点： 活细胞：可长时间监控、检测，定量评估 可控制：研究对象、条件可人为的控制。 研究的样本可以达到比较均一性。 研究的内容便于观察、检测和记录。 研究的范围比较广泛。 研究的费用相对较经济。 缺点：细胞生存在人工的培养环境中，虽然模 拟体内环境，但仍有很大差异。 细胞培养的优缺点 细胞培养技术的应用领域 在病毒学上的作用：未知传染因子的分离、病毒病诊断、疫苗生产，研究病毒的复制和遗传，对病毒本质进一步认识 在药物学上的作用：进行药物的基础研究和药物研发，生产出技术含量高的新药 在肿瘤学研究上的作用：为临床肿瘤的治疗提供依据 在细胞功能与分化研究中的应用：诊断和治疗 在免疫学中的应用：免疫产品的制备 基因工程和基因治疗 细胞培养的基本知识 细胞培养的设备条件 细胞培养的生长条件 培养细胞的生长特性 培养细胞的冻存复苏 超净工作台 CO2培养箱设定的条件为37 ℃ ，5％CO2 CO2培养箱 培养瓶（板、皿） 倒置显微镜 1 细胞的营养需要 人工合成培养基：包含基本营养物质(氨基酸、维生素、碳水化合物及一些无机离子) 血清(10% fetal calf serum) 2 细胞的生存环境 温度: 一般37℃ pH值: pH: 7.2-7.4 。 CO2为细胞生长所需要，同时又是细胞代谢的产物，并与维持培养基的pH有关， CO2增加将使pH下降。 CO2 +H2O ← →H2CO3 ← →H+ + HCO3- 2、培养细胞的生长条件 3 无污染及无毒： 无毒是培养细胞的必须条件。 凡与细胞直接接触者(如培养瓶、底物、培养剂等) 或间接接触者(如瓶盖瓶塞等)，若具细胞毒性，都会导 致细胞的死亡。 污染问题包括细菌等微生物的污染、不同细胞类型 的交叉污染及上述有害物质的污染。 1.培养细胞的生长方式： 贴壁生长： 必须贴附于支持物表面才能生长，见于各种上皮和成纤维细胞。 悬浮生长：于悬浮状态下即可生长，不需要贴附于支持物表面，见于血液系统细胞。 3、培养细胞的特性 2. 培养细胞的生长特点： a.贴附 贴附并伸展，是多数体外培养细胞的基本生长特点。虽然血细胞如淋巴细胞在活体体内并无聚集的倾向并在体外可于悬浮状态中生长，但是大多数的哺乳动物细胞在体内和体外均附着于一定的底物而生长。 b.接触抑制及密度依赖性 细胞贴壁过程