双峰骆奶对2型糖尿病大鼠肝脏细胞凋亡的影响王雪莹1张全伟1张.DOC

双峰骆奶对2型糖尿病大鼠肝脏细胞凋亡的 王雪莹张全伟1张勇1赵兴绪1* 1.甘肃农业大学动物医学院，兰州 730070；摘要：(目的)观察驼奶对2型糖尿病大鼠肝脏细胞凋亡的保护作用。（方法 通过链脲佐菌素(treptozotocin,STZ)结合高糖高脂饮食诱导建立2型糖尿病(type 2 diabetes mellitusT2DM)大鼠模型，大鼠随机分为模型组（DMC）、骆驼奶低剂量组（LCM）、骆驼奶高剂量组（HCM）二甲双胍组（etformin hydrochloride,MHT），另设正常对照组)。4周后大鼠体重并采血，糖耐量和胰岛素（I）的变化；采用苏木精-伊红HE）染色检测肝脏组织的病理变化；采用免疫组织化学染色和免疫印迹法检测肝脏组织BCL-2、BAX蛋白Bcl2-associated X protein,BAX )的表达；采用荧光实时定量RT-PCR法检测BCL-2、BAX、Caspase3（cysteinyl aspartate specific proteinase 3和NF-(Bnuclear factor-kappa B,NF-(B）mRNA的表达。（结果） 与组相比，MHTHCM组血糖明显下降；HE染色DMC组肝细胞水肿，部分肝细胞核、碎裂、溶解驼奶治疗组和MHT组肝细胞形态正常，胞核结构清晰；与DMC组相比，HCM组和MHT组大鼠肝脏细胞BAX表达减弱，BCL-2表达增强BAX/BCL-2降低（0.01）；BCL-2 mRNA在MHT组中表达最高，BAX mRNA在LCM组和MTH组中表达最高；DMC组、MHT组、LCM组和HCM组均可见BCL-2和BAX蛋白的表达。骆驼奶能抑制BAX蛋白的表达而促进BCL2蛋白表达揭示骆驼奶能抑制细胞凋亡，促进细胞增殖。（结论）骆驼奶降低2型糖尿病大鼠的血糖及肝脏细胞损伤，对糖尿病治疗作用临床治疗糖尿病提供。 随着社会经济发展，饮食结构改变，糖尿病已成为在世界范围内广泛流行的常见的慢性疾病，伴胰岛素抵抗(insulin resistanceIR)的2型糖尿病(type 2 diabetes mellitusT2DM)是严重危害人类健康的疾病其发病率占糖尿病的90%以上，而肝脏是参与体内糖代谢最重要的器官糖尿病与肝脏疾病相互影响。因此，T2DM的研究受到人们的广泛重视。目前对糖尿病的治疗主要以西药为主，但西药治疗存在继发性失效和严重的不良反应[1]等缺点。据此，寻找对机体无损伤或损伤较小的药物，是当前糖尿病亟待解决的问题。 骆驼奶用于治疗各种肝炎、结核、过敏性疾病、胃溃疡和肿瘤[2-4]曾有报道指出骆驼奶用于1型糖尿可以降低患者的胰岛素（I）用量，Rogers（1998）[5]和Agrawal（2005[6]等报道骆驼奶能降低1型糖尿血糖，减少胰岛用量，骆驼奶中含有一种具有类似I许多特性的蛋白质，能安全有效的改善糖尿病患者长期血糖控制对骆驼奶中I进行成分和结构分析发现，骆驼奶中I样蛋白在酸性环境下不形成凝固结构，不易被酸性物质破坏，使其可经过胃被小肠吸收，而降低，克服口服I存在问题[7]。此外骆驼奶中维生素C含量是牛奶3倍多[8]。维生素C单独或联合其他药物可用于糖尿病及并发症预防治疗[9-10]。但未见骆驼奶对T2DM的实验研究，尤其是对T2DM动物的肝脏细胞凋亡的保护作用的文献甚少。本研究链脲佐菌素（treptozotocin,STZ）建立T2DM大鼠，以此为研究对象，探讨研究骆驼奶对肝脏细胞的保护作用，以此为临床治疗糖尿病及其并发症提供新思路。 1材料与方法 材料 1.1.1 动物 选用健康6周龄雄性Wistar大鼠60只，体重120150 g，购自兰州大学动物实验中心，动物合格证号：SCXK 甘 2005-0007。 1.1.2骆驼奶的采集 骆驼奶采自甘肃酒泉瓜州县锁阳镇新沟村， [11]。采驼奶前，用干净的毛巾擦洗骆驼乳头，用75%酒精消毒，骆驼奶收集于灭菌处理的不锈钢容器中，尽快运回实验室（ 8 h），-80的冰箱备用。 1.3 药品与试剂 盐酸二甲双胍（etformin hydrochloride,MHT）（上海施贵宝制药有限公司批号0703061）CX4 Pro全自动生化分析仪(美国Beckman)；Onetouch Ultra Ⅱ快速血糖仪(美国强生)；兔抗大鼠BCL-2、BAX蛋白Bcl2-associated X protein，BAX )、山羊抗兔IgG二抗、抗兔IgG免疫组化试剂盒（武汉博士德生物公司）；DAB显色试剂盒（武汉博士德生物公司）；RNA Plus试剂、PrimeScriptTM RT-PCR试剂盒、SYBR? Premix Ex TaqTM PCR试剂盒（大连宝生物公司）；焦炭酸二乙酯（DEPC）（Sigma公司）；PV