压力负荷诱导心肌细胞凋亡的机制-生物化学与分子生物学专业论文.docx

十国协和医科太学博士论文压力负荷诱导心肌细胞凋亡的机制受体配体(TRAIL)增强了牵张诱导心肌细胞凋亡的效果，⑤人工合成的 可溶性死亡受体肽段(sDR5)则表现出抑制作用。说明牵张诱导心肌细胞 凋亡的机制涉及死亡受体凋亡信号的激活。3研究了p53介导的凋亡信号在调控牵张诱导的心肌细胞凋亡中的作用。证 实了牵张后p53表达的上调，但发现重组腺病毒介导的p53DN不能完全抑 制牵张诱导的心肌细胞的凋亡，并且完全不能抑制细胞色素C释放。说明牵张诱导的心肌细胞凋亡过程中存在p53非依赖的信号通路。与现有的文 献结论不同。4以Fluo．4为钙离子荧光探针，通过激光共聚焦显微成像技术，研究了牵张 诱导心肌细胞钙水平的变化以及钙与心肌细胞凋亡的关系。牵张诱导了迅 速而显著的细胞内钙水平升高。①钙螯合剂EOTA．AM，②L-型钙通道阻滞 剂nifedipine，③肌浆网钙释放通道抑制剂ryanodine，④肌浆网钙泵抑制剂thapsigargin和⑤机械敏感通道(SAC)抑制剂GdCl3都能够抑制牵张诱导 的心肌细胞钙信号。说明牵张通过激活SAC引起胞外钙内流，进一步触发 心肌细胞内钙致钙释放(CICR)过程，诱导心肌细胞内钙水平升高。抑制 钙信号能够部分抑制牵张诱导的心肌细胞凋亡，抑制牵张诱导膜电位减低、 ROS水平升高和Caspase 3的激活，但不能抑制细胞色素C释放。首次证 明牵张诱导或转化的钙信号是调控心肌细胞凋亡的重要生物信号，但同时 仍需要其它因素参与调控。 以DAF．FM为一氧化氮(NO)荧光探针，通过激光共聚焦显微成像技术首 次证明了牵张诱导心肌细胞内NO水平升高，一氧化氮合酶(NOS)表达 增加，并研究了牵张上调NOfiNOS系统的机制，及其在调控心肌细胞凋亡 中的作用。发现①抑制NO合成和抑制NO相关的cGMP合成都能够抑制 牵张诱导的心肌细胞凋亡和细胞色素C释放等相关的线粒体凋亡事件，表明NO可能参与调控牵张诱导的心肌细胞凋亡。②钙信号抑制剂(nifidepine， ryanodine，thapsigargin等)和NOS抑制剂(L-NAME)能分别抑制牵张诱 导的心肌细胞的NO水平和钙离子水平升高，说明牵张诱导的ca2+和NO 信号传导途径问存在相互作用。⑨首次证明抑制钙信号和eNOS活性都能 够抑制牵张诱导的iNOS表达，表明牵张可能通过Ca。eNOS-NO．iNOS-NO2抽’要级联信号系统放大NO信号，从而调控细胞凋亡，其中牵张诱导的钙离子 可能作为初始信号。由此提出该信号放大系统很可能是心肌细胞感受和转 导机械牵张信号的机制。④进一步在压力负荷型心肌肥厚大鼠模型中证实 了压力负荷能够在体内诱导NOS的表达，说明上述机制可能是在体内真实 存在的。6．对比研究了心肌细胞和心脏成纤维细胞对牵张的不同反应。成纤维细胞没 有出现凋亡现象，而是表现为DNA的合成和细胞周期的变化。说明牵张可 能诱导了成纤维细胞的增生。进一步研究将可能提示为什么同一种刺激能 够在两种细胞内诱导截然不同的反应，同时也可能为理解牵张如何作用于 细胞的8t$1提供线索。综上所述，本文系统研究了牵张诱导心肌细胞凋亡的信号通路：首次证实牵 张诱导了心肌细胞中非p53依赖的线粒体凋亡通路；首次发现死亡受体介导的凋亡信号参与调控牵张诱导的心肌细胞凋亡：首次提出牵张刺激可能通过细胞内钙信号和一氧化氮信号调控线粒体依赖的细胞凋亡，进一步提出牵张信号向细胞内 生物信号的转导过程中可能存在Ca．NO—iNOS-NO的信号放大步骤；另外，还对 比研究了两种心脏细胞在牵张作用下的不同反应；并且在整体动物模型上进行了 体内实验的验证。这些结果提出了压力负荷诱导心肌细胞凋亡的新机制，进一步 详细阐明这些新机制，将为解释压力负荷诱导如何诱导心脏重塑提供新的线索， 并将为临床治疗压力负荷型心脏重塑提供新的思路。关键词：细胞凋亡，机械牵张，心肌细胞，心脏重塑，钙，一氧化氨／一氧化氯合酶中国协和医科土学博士论文 压力负荷诱导心肌细胞凋亡的机制Mechanism ofMechanical Stretch-induced Apoptosis in Neonatal Rat CardiomyocytesLIAO Xu-DongDirected by Professors CHEN Lan-Ying and CHEN Quan ABSTRACTMechanical force functions as an important biological signal to cardiac cells to maintain their physiological role．Mechanical overload triggers cardiac remodeling， which was