辛伐他汀预处理对大鼠肢体缺血再灌注肺损伤的影响及机制探讨-麻醉学专业论文.docxVIP

·英文缩略语·lO中国医科大学研究生学位论文独创性声明本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。论文作者签名：韭垒日期：盘望』’中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属中国医科大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为中国医科大学，且导师为通讯作者，通讯作者单位亦署名为中国医科大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外)，以采用影印、缩印或其他手段保存论文。论文作者签名：亟雠指导教师签名：2么里盘剁日期：一型盘·中文论著摘要·辛伐他汀预处理对大鼠肢体缺血再灌注肺损伤的影响及机制探讨刖舌多种原因，如腹主动脉瘤手术、四肢大血管栓塞或损伤、高位肢体离断、严重肢体挤压伤、断肢再植及肢体手术长时间应用止血带等均可造成肢体缺血。恢复充足的血供乃缺血组织成活的关键，然而缺血组织再灌注损伤不仅存在于缺血组织，尚可进一步导致其他远隔器官的损伤，甚至多器官功能障碍(MODS)。肺脏作为最易受损的器官之一，若损伤严重，则可导致急性呼吸窘迫综合征(ARDS)，但目前对其发生机制尚未完全阐明。羟甲基戊二酰辅酶A(HMGCoA)还原酶抑制剂又称他汀类药物，此类药物通过竞争性抑制内源性胆固醇合成限速酶HMGCoA还原酶，使血清胆固醇清除增加，水平降低。辛伐他汀作为他汀类降脂药的一种，除具有传统的降脂作用外，其非降脂作用亦成为研究热点。研究表明，辛伐他汀可减轻心、脑等脏器的缺血再灌注损伤，但对肢体缺血再灌注肺损伤的影响尚不清楚。基于上述原因，本实验拟通过大鼠肢体缺血再灌注肺损伤模型，研究辛伐他汀预处理对大鼠肢体缺血再灌注肺损伤的影响及机制，为临床应用其预防治疗肺损伤提供理论依据。本实验分三个部分，包括：一、辛伐他汀预处理对大鼠肢体缺血再灌注肺损伤的影响；二、辛伐他汀预处理对肢体缺血再灌注肺损伤大鼠氧自由基和一氧化氮(N0)的影响；三、辛伐他汀预处理对肢体缺血再灌注肺损伤大鼠血红素氧合酶一1(Ho．1)的影响。材料与方法一、实验材料(一)实验动物健康雄性SD大鼠144只，体重250--一3009，由中国医科大学实验动物中心提供。(二)实验仪器PCR扩增仪(Biometra，德国)；DYY-6B型电泳仪(北京六一仪表厂，中国)；AE一240型电子天平(Mettler，日本)；722型分光光度计(上海分析仪器厂，中国)；3K15型高速离心机(Sigma，德国)；UV-300型紫外分光光度计(Unicam，美国)；OT一701型输液泵(JMS，德国)；GemPremier3000型血气分析仪(IL，美国)；ES一1000SPM型超声血流仪(Hayashi Denki，日本)；凝胶成像系统(Kodak，美国)；BX一4l型显微摄像系统(Olympus，日本)；Scion Image图像分析系统(Apple，美国)。(三)实验试剂及药品辛伐他汀(MerckSharpDohme，英国)；NO、NOS、MDA、SOD、MPO及考马斯亮蓝蛋白检测试剂盒(南京建成生物工程研究所，中国)；Trizol试剂盒(Invitrogen，美国)；DNAMarker、RT—PCR试剂盒及引物合成(TaKaRa，日本)；山羊血红素氧合酶一1(Ho-1)、兔内皮型NOS(eNOS)及兔诱导型NOS(iNOS)多克隆抗体(Santacruz，美国)；碱性磷酸酶标记的兔抗山羊及山羊抗兔IgG抗体(Chemicon，美国)；戊巴比妥钠(上海化学试剂采购供应站，中国)。二、实验方法(一)实验一SD大鼠48只，随机分为6组(n=8)：假手术组(C组)、肢体缺血再灌注组(IR组)、辛伐他汀1、5、lOmg·kg-1odq预处理组(S。组、S。组、S。。组)和辛伐他汀对照组(S组)。C组和IR组每同清晨lml蒸馏水灌胃1次，连续3d；S，组、Ss组、S。。组和S组分别于每日清晨将1、5、10、10mg·kg-1·d1辛伐他汀溶于lml蒸馏水灌胃1次，连续3d。最后一次给药后2h，除C组和S组行假手术处理外，其余各组均用无创血管夹夹闭大鼠双后肢股动脉，使其缺血2h再灌注3h。2再灌注末，颈动脉采血Iml行血气分析，放血处死大鼠，光镜观察肺组织病理学变化，计数肺泡和毛细血管间隙多形核中性粒细