以端粒酶为靶点的cdse量子点分子信标的设计、合成及其光学性质研究-药物化学专业论文.docxVIP

独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作和取 得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢之处外，论文中不包含其他 人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得天津理工大学或 其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研 究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：签字日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津理工大学 有关保留、使用学位论文 的规定。特授权 天津理工大学可以将学位论文的全部或部分内容编入 有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编， 以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文的复本和电子 文件。（保密的学位论文在解密后适用本授权说明）学位论文作者签名：导师签名：签字日期：年月日签字日期：年月日摘要经研究发现端粒酶 hTERT mRNA 是端粒酶中只在恶性肿瘤细胞内表达的成分。因 此本研究提出采用 CdSe 纳米量子点作为荧光材料，开发一种以 hTERT mRNA 为靶标的 量子点分子信标。拟开发一种能够快速检测的方法来确定细胞是否癌变。研究的主要内 容包括：一、CdSe 量子点的制备及其光学性质的研究通过一锅法制备了水溶性极好的 CdSe 量子点。经过紫外光谱检测，该 CdSe 量子 点在 380 nm 处有最大吸收，并且吸收峰单一；经荧光光谱分析显示，该 CdSe 量子点在 550 nm 处有最大发射波，其荧光强度高达 6500，斯托克位移长达 170 nm。随着 pH 的 升高（由 6.3 至 8），荧光强度逐渐加强；随温度的升高，荧光强度则不断减弱。实验证 明巯基乙酸浓度和陈化温度的提高会直接影响量子点的尺寸效应，产生不同于体材结构 的缺陷发射。不同浓度 TGA 对 CdSe 量子点的紫外吸收影响不明显，而随着 TGA 浓度 的增加，CdSe 量子点的荧光发射峰从 570 nm 出现蓝移，并最终稳定在 550 nm 处；CdSe 量子点的紫外吸收峰和荧光发射峰均随陈化温度的升高而蓝移。二、Cd 体材量子点对 KM 小鼠的急性毒性研究通过对 CdSe 量子点的制备，选取两种 Cd 体材的量子点，CdSe 量子点和 CdSe-ZnS 量子点。用其喂养小白鼠实验结果显示，三组小鼠在实验前前生长状况良好。A 组用去 离子水喂养数天后天后，小鼠状态无异常。B 组用 CdSe 量子点溶液喂养后，小鼠有点 萎靡，毛发微微竖立，呼吸较为均匀，排便正常，进食正常。C 组用 CdSe-ZnS 量子点 溶液喂养后，状况与 B 组相似，较 B 组稍好。实验结果说明 CdSe 量子点和 CdSe-ZnS 量子点对小鼠产生轻微影响，但毒性不大。对小鼠血液的荧光切片显示 CdSe 量子点能 够进入小鼠血细胞。其白光切片显示小鼠的血细胞圆润饱满，情况良好，分布略微不均 匀，但不影响总体观察。对小鼠的红细胞数量和白细胞数量进行检测，结果显示，由 CdSe 量子点溶液喂养小老鼠的红细胞和白细胞数量均低于正常范围；用 CdSe-ZnS 量子 点喂养的小鼠红细胞数量和白细胞数量接近对照组。三、分子信标 CdSe QDs-DNA-Dabcly 的构建及光学性能分析以羧基修饰的 CdSe QDs 与氨基修饰的单链 DNA 反应合成了分子信标，并且分别 测量了 CdSe QDs、CdSe QDs-ssDNA 分子信标以及 CdSe QDs-ssDNA 分子信标与靶链 共聚物的荧光强度，结果显示，由于荧光共振能量转移机制的存在，连接单链 DNA 的 CdSe QDs 荧光强度骤减，而当 CdSe QDs-ssDNA 分子信标与靶链相连后，荧光共振能 量转移的现象消失，荧光得到恢复。以上实验结果表明，本研究构建的 CdSe QDs 波长转移型分子信标，敏感性强，能 用于靶核酸链检测，有望成为细胞染色和成像的荧光制剂，通过检测荧光信号可以追踪 分子信标的准确位置，实现对肿瘤细胞成像和诊断。关键词： 端粒酶；CdSe 量子点；分子信标；荧光共振能量转移AbstractHuman telomerase reverse transcriptase gene (hTERT) was expressed specifically at high level only in tumors. So, in this study, a novel molecular beacon using CdSe quantum dots as fluorescent donors and based on the fluorescence resonance energy transfer system would be developed for dete