菌种选育技术12526h.pptVIP

《微生物工艺技术》 菌种选育与 保藏技术① 一、发酵工业对菌种的要求 ? ① 菌种在有限的发酵过程中生长繁殖快和代谢能力强。 ? ② 菌种遗传特性稳定，不易变异退化，且菌种所要求的工艺控制比较粗放，易于控制，有利于发酵生产运行和产品质量的稳定。 ? ③ 发酵过程中产生的副产物少，不但有利于提高底物的有效转化率，而且目的产物分离容易，有利于降低提取成本和提高产品质量。 ? ④ 抗噬菌体感染的能力强。 ? ⑤ 菌种不是病源菌，对人、动物、植物和环境都不具有潜在的危害性。 ? ⑥ 菌种具备利用广泛来源原料的能力，并对发酵原料成分波动的敏感性尽可能小。 二、优良菌种选育方法 （一）自然选育 ? 不经过人工处理，而是根据微生物的自然突变进行筛选菌种的过程，称为自然选育。 ? 自然选育的一般流程 ? 采样地点的确定要根据筛选的目的、微生物的分布概况及菌种的主要特征与外界环境关系等，进行综合、具体地分析来决定。 ? 如果预先不了解某种生产菌的具体来源，一般可从土壤中分离。 ? 由于酵母类、霉菌类对碳水化合物的需要量比较多，一般又喜欢偏酸性环境，故在植物花朵、瓜果种子及腐殖质含量高的土壤等上面比较多。 ? 所谓增殖培养就是给混合菌群提供一些有利于所需菌株生长或不利于其它菌型生长的条件，以促使目标菌株大量繁殖，从而有利于分离它们。 （二） 诱变选育 ? 利用各种诱变剂处理微生物细胞，提高基因的随机突变频率，扩大变异幅度，通过一定的筛选方法，获取所需要优良菌株的过程，称为诱变选育。 1、诱变选育的主要环节 ① 以合适的诱变剂处理大量而均匀分散的微生物细胞悬浮液(细胞或孢子)，以引起绝大多数细胞致死的同时，使存活个体中DNA碱基变异频率大幅度提高。 ② 用合适的方法淘汰负变异株，选出极少数性能优良的正变异株，以达到培育优良菌株的目的。 2、影响诱变育种的主要因素 3、诱变育种技术实例 出发菌株的选择 诱变因素及其剂量的选择 单孢子（或单细胞）悬液的制备 前培养 出发菌株的选择 野生菌株 生产中自发突变的高产菌株 经诱变获得的高产菌株 一般认为诱变获得高产菌株，再诱变易 产生负突变，再度提高产量比较困难。 再作为诱变的出发菌株，这样有可能 收到比较好的效果。 采用连续诱变的方法，在每次诱变之后 选出3～5株较好的菌株继续诱变。 如果遇到高产菌株再诱变进一步提高 产量效果不佳时，可以先行杂交。 单孢子（或单细胞）悬液的制备 达到单细胞状态，均匀接触诱变剂。 一般处理细菌的营养细胞，采用生长旺盛 的对数期，其变异率较高且重现性好。 霉菌和放线菌都采用孢子悬液，但孢子生 理活性处于休眠状态，最好采用刚成熟的孢子。 一般处理真菌的孢子或酵母时， 其菌悬液的浓度大约为106个／mL。 细菌和放线菌的孢子的浓度大约 为108个／mL。 前培养 诱变处理前，将细胞在添加嘌呤、嘧啶等 碱基或酵母膏的培养基中培养20～60 min， 再进行诱变处理，则变异率可大幅度提高。 诱变因素及其剂量的选择 凡是能引起生物体遗传物质发生 突然或根本改变的物质。 物理诱变剂 化学诱变剂 紫外线、X射线、r射线、快中子、 微波、超声波、电磁波、激光、 宇宙线等 。 碱基类似物、烷化剂（亚硝基胍、 甲基磺酸乙酯等）、吖啶色素 等。 诱变剂的剂量 绝对剂量 相对剂量 紫外线：erg-1/mm2 电离辐射：拉德（rad） 伦琴（R） 照射时间 erg（尔格）：功的单位 * * * * 周期短 产率高 高产菌株 生长快速 遗传稳定 工艺粗放 自发突变 回复突变 变异 多个遗传标记的菌株 基因工程菌株 例如 副产物少 相对于细菌而言 例如 曾经选育出很多抗噬菌体的菌株 安全性 例如 γ-氨基丁酸生产菌株 原料粗放 例如 透明质酸生产菌株 自然选育 诱变选育 杂交育种 原生质体融合技术 基因工程育种 自然突变 筛选 宇宙射线 各种短波辐射 环境中的诱变物质 微生物产生的诱变物质 自 然 突 变 采样 酵母 霉菌 增殖培养 纤维素酶产生菌 纤维素为唯一碳源 脂肪酶产生菌 植物油为唯一碳源 控制其它营养 控制pH 控制温度 添加抑制剂 分离放线菌 添加酚液 抑制霉菌与细菌 纯种分离 划线法 分区划线适用于浓度较大的样品 连续划线适用于浓度较小的样品 稀释涂布法 初筛 定性或半定量测定 如何初筛产淀粉酶菌株？ 筛选产 α-淀粉酶的菌株 琼脂培养基加0.1%可溶性淀粉 培养后喷上碘-碘化钾溶液 产生淀粉酶的菌周围就出现透明圈 无活力者呈蓝色，透明圈愈大表示活力愈高。 复筛 将初筛