蛋白质的泛素化.ppt

蛋白质的泛素化 一、什么是泛素、泛素化及作用？ 二、泛素化相关酶类 三、 E3酶分类 四、泛素化系统降解机制 五、靶蛋白的识别规则 六、泛素化过程与细胞信号的调控 七、 DNA 修复 八、 p53- Mdm2 模块和泛素化系统 什么是泛素、泛素化及作用 2004年10 月6 日, 瑞典皇家科学院宣布将2004 年度诺贝尔化学奖授予两位以色列科学家阿龙·切哈诺沃、阿弗拉姆·赫尔什科和美国科学家欧文·罗斯, 以表彰他们发现了泛素调节的蛋白质降解。 “泛素”( ubiquitin) 是一种由76 个氨基酸残基组成的蛋白质小分子, 由于其广泛存在于各种真核生物体内而得名。 泛素化是单个或多个泛素在泛素激活酶、泛素结合酶及泛素蛋白质连接酶的作用下共价修饰底物蛋白质的过程。 泛素最广为人知的功能是介导短周期蛋白质的水解, 而事实上这种小肽参与细胞生命活动的几乎所有方面, 包括细胞的分裂、生长、细胞间的信号转导、细胞的运动及凋亡等。以上所有这些功能的实现都是依赖泛素分子共价地结合到特定的靶蛋白上。 泛素化相关酶类 1、泛素活化酶（E1）是催化泛素与蛋白底物结合所需的第一个酶,为细胞的活性和生存所必需。 2、泛素-联连酶（E2）泛素偶连酶(ubiquitin2conju2gating enzymes ,E2s) 是泛素与蛋白底物结合所需的第二个酶,现在至少有30 种E2s 被分离纯化。 3、底物识别蛋白（E3酶）是泛素与蛋白底物结合所需的第三个酶。E3s 在决定泛素介导的底物蛋白降解的选择性方面具有重要作用。 E3酶分类 蛋白质在被降解之前需与多聚泛素链相连接，这个过程E3起着关键的作用，E3常以多亚基蛋白复合物的形式,完成底物的识别及E2的招募作用。 E3酶分为N末端规则家族、HECT家族、Ring finger家族和U2box家族几大类： 1）N 末端规则家族E3代表物为E3α，它是一种相对分子质量约200kDa的蛋白,能够直接结合到蛋白质的特异残基上。E3α能识别特异性的E2,所以便于活化的泛素从E2转移到底物蛋白。 2）HECT结构域(homologous to E6-AP C terminus,HECT)家族的泛素连接酶E3s是目前所知的唯一的可以和泛素形成硫酯键中间体的泛素连接酶，并且它可以直接催化靶蛋白的泛素化。HECT E3s 有一个分子量大约为40 kDa的具有保守性的羧基末端催化结构域，即HECT 结构域。HECT E3s 的N 末端不具有保守性，并且N 末端决定了底物的特异性识别。 3）环指(Ring finger)结构E3由含8个半胱氨酸和组氨酸的保守序列组成: Cys2X22Cys2X (9～39) 2Cys2X ( 1 ～3) 2His2X ( 2, 3) 2Cys2X22Cy2s2X ( 4 ～48) 2Cys2X22Cys(X代表任意一种残基), 这一序列可形成环指结构,螯合两个Zn2 + 。常见的环指类E3有SCF复合体、VHL2CBC复合体和APC复合体等。 4) U-box 家族的泛素连接酶E3 是真核细胞蛋白质翻译后控制所必需的。此类蛋白质的C 端都包含一个大约70个氨基酸残基的从酵母菌到人类具保守性的U-box 结构域，U-box 的三维结构类似于RING 结构域家族泛素连接酶E3s 的RING 结构域，是此类型的泛素连接酶酶活性所必需的。 泛素化系统降解蛋白质的机制 ( 1) 泛素活化酶( ubiquitin activating enzyme,E1) 催化泛素C 末端的甘氨酸(Gly) , 形成泛素-腺苷酸中间产物, 然后激活的泛素被转移至E1酶的Cys 残基上。 ( 2) 活化的泛素通过转酰基作用进一步转移到泛素缀合蛋白( ubiquitin conjugating enzyme, E2)上, 形成E2- 泛素巯基酯。 ( 3) E2- 泛素复合体接下来可以有两种方式与要降解的底物蛋白质结合: 一是直接从E2 转移给底物蛋白质形成泛素- 蛋白质复合体; 二是底物蛋白质首先与泛素连接酶( ubiquitin ligatingenzyme, E3) 结合, 然后底物蛋白质与E2 转移的泛素结合。在所有依赖E3 的连接和一些非依赖E3 的连接反应中, 多个泛素单元可与底物蛋白质连接成泛素多聚链, 各个泛素单体之间连接的位点主要是第48 位的赖氨酸( Lys48) 。 最终泛素- 蛋白质复合体主要是被一种沉降系数为26S 的蛋白酶体所