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细菌“活的非可培养状态”研究进展 Progress on Viable but non-culturable state of bacteria (VBNC) * 定义： 1982年提出 即细菌处于不良环境条件下，细胞通常缩小为球形，用常规方法培养不能生长繁殖，但仍然具有代谢活性，是细菌的一种特殊存在形式 处于该状态的病原菌，一定条件下可以复苏，并具有潜在的致病性 * 研究现状： 存在VBNC状态的细菌种类及相关诱导因素 细菌VBNC状态的生物学特性 VBNC细菌的复苏 VBNC病原菌的致病性 VBNC细菌的检测方法 细菌VBNC状态的意义 * 表1 部分已报道的进入非可培养状态的 细菌种类及与之相关的诱导因素 细菌名称 菌株来源 相关因素 参考文献 大肠杆菌 培养基、淡水、海水、废水、沉积物…… 温度、盐度、可见光、紫外线、营养盐缺乏、抗生素…… Xu等, Grimes和Colwell等,Linder和Oliver等,Byrd和Colwell等, Arana 等, …… 霍乱弧菌 咸水、半咸水 温度、营养盐缺乏、盐度（渗透压）、抗生素 Xu 等, Linder 和Oliver , Colwell 等, Xu 和Colwell , Wolf 和Oliver 副溶血弧菌 海水、培养基 温度、营养盐缺乏 Wolf 和Oliver,Jiang和Chai，姚斐和徐怀恕等，Hin-chung Wong等 创伤弧菌 培养基、海水（咸水）、贝类、空气 温度、营养盐缺乏、盐度 Linder 和Oliver,Oliver和anucha,Oliver等,Nilsson等,Wolf 和Oliver 等,Bryan等 溶藻胶弧菌 海水 盐度（渗透压） Hoff 伤寒沙门氏菌 淡水、海水、土壤 温度、盐度、营养盐缺乏、可见光 Davies 和Evison,Turpin等,Smith等 * 续 表1 部分已报道的进入非可培养状态的细菌种类及与之相关的诱导因素 细菌名称 菌株来源 相关因素 参考文献 空肠弯曲菌 培养基、淡水 温度、营养盐缺乏、曝气、高浓度氧 Rollins 和Colwell, Medema等, Beumer等, Jones等,Boucher等,Harvey和Leach 嗜肺军团菌 淡水、海水 温度、抗生素、生物因子 Hussong等, Paszko2Kolva等,Bej等, Steinert等 幽门螺杆菌 培养基、蒸馏水、淡水、海水、空气 温度、营养盐缺乏 Mai等,Shahamat 等, Cellini等 痢疾志贺菌 废水、淡水、海水 温度、营养盐缺乏 Islam等,Rahman等 金黄色葡萄球菌 培养基 营养盐缺乏 Trainor 等 小肠结肠炎耶尔森菌 海水 温度、营养盐缺乏 Smith等 肺炎克雷伯氏菌 海水（咸水） 营养盐缺乏 LopezTorres等,Byrd等 …… …… …… …… * 至今为止共计40多种细菌进入“活的非可培养状态”的报道 基本全部为与人类关系密切的致病菌 * 与VBNC状态相关的诱导因素 理化因素 温度 低温：霍乱弧菌、创伤弧菌 4~6℃ 高温：空肠弯曲菌 30℃ 、大肠杆菌 25℃ 营养盐缺乏 添加营养盐到培养基中并一定增强细菌的活性或可培养能力，甚至可使其可培养能力加速降低。 创伤弧菌在营养盐丰富培养基中低温培养同样也会进入VBNC状态 * 续 与VBNC状态相关的诱导因素 理化因素 可见光、紫外线 盐度、渗透压 对多数肠道菌的生存影响较大 氧胁迫 eg. 空肠弯曲菌在振荡条件下易进入VBNC状态 重金属、消毒剂等 * 续 与VBNC状态相关的因素 生物因素 可能具有一定的保护作用 使细菌从VBNC状态复苏 降低细菌进入VBNC状态的比例 保护细菌不受某些消毒处理的影响 * 细菌VBNC状态的生物学特性 形态 多数G-菌体积变小，缩成球状 某些G+菌体伸长 生理生化 核酸物质密度降低 细胞质浓缩 蛋白质总量下降 营养盐转运、呼吸速率下降 * 续 细菌VBNC状态的生物学特性 生理生化 对某些胁迫的抗性增强 细胞膜结构完整但不对称 脂质总量下降 主要膜脂含量下降，某些短链、长链脂肪酸含量增加 合成一些新蛋白 细胞壁肽聚糖交联程度增大 膜势能降低，ATP浓度降低 * VBNC细菌的复苏 如果VBNC应答确实是细菌的一种存活机制 ，那么从该状态复苏的能力也应该是必要的 在实验室条件下，目前没有可使所有VBNC细菌都能复苏的报道 进入VBNC状态越久，复苏可能性越小 * 已报道的可使VBNC细菌复苏的条件 直接逆转不利条件 培养温度恢复正常 添加营养盐 添加渗透压保护剂 将VBNC细菌转入宿主体内、或与宿主共培养 注射至兔肠结扎段中，继续培养一段时间