蛋白质诱导表达及检测.pptVIP

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蛋白质诱导表达及检测

蛋白质的检测 免疫印迹法 基于抗体可与目的蛋白特异性结合的原理. 转移 染色 封闭 加 一抗 洗膜 加二抗 洗膜 检测 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 蛋白质的诱导表达及检测 2004-06-10 刘 娜 * 蛋白质的检测 蛋白质的诱导表达 * 蛋白质的检测 Western blot(蛋白质印迹) 首先将蛋白质用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳按分子量大小 分开,在将蛋白质转移到NC膜上,膜上蛋白质的位置可以保持在 与胶相对应的原位上。然后,以蛋白质的抗体为探针,对目的蛋 白质进行定性或半定量分析。 * 蛋白质的检测 蛋白质样品的制备 SDS转移 染色 目的蛋白的检测 * 细胞或组织的裂解 细菌的裂解 蛋白质样品的制备 蛋白质的检测 * 蛋白质样品的制备 蛋白质的检测 细菌的裂解 2xSDS凝胶加样缓冲液 100mmol/L Tris.cl (PH 6.8) 200mmol/L DTT 4% SDS 0.2% 溴酚蓝 20%甘油 * 蛋白质的检测 SDSSDS(变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳) 是将分子筛效应和电荷效应结合在一起的 一种具有高分辨率的电泳方法. * 聚丙烯酰胺凝胶电泳 连续的凝胶电泳 不连续的凝胶电泳 蛋白质的检测 SDS* 不连续的凝胶电泳 蛋白质的检测 SDS上层胶(浓缩胶) 下层胶(分离胶) 浓度 PH 2%-6% 6.8 5%-20% 8.8 * 蛋白质的检测 SDS%聚丙烯酰胺(29:1的丙烯酰胺:双丙烯酰胺) 浓缩胶缓冲液(Tris cl PH 8.8) 分离胶缓冲液(Tris cl PH 6.8) 10%过硫酸铵 TEMED H20 凝胶的配制 * 样品的电泳 加热变性蛋白样品 加入Running Buffer(Tris cl,甘氨酸) 蛋白质的检测 SDS* 目的蛋白的检测 蛋白质的检测 SDS考马斯亮蓝染色法 免疫印迹法 * * * * * * * * * * * * * * * * * * *

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