专题7第1课时基因工程.pptVIP

本课件主要使用工具为Office2003，Mathtype6.0, 几何画板4.0, Flashplayer10.0 更多信息请登录： · 2011届新课标高中总复习（第2轮） 生物（福建） 专题七 现代生物科技 一、基因工程的三种基本工具 1．限制性核酸内切酶——DNA分子手术刀 来源：主要从原核微生物中分离。 作用特点：具有专一性，能特异性识别双链DNA的特定核苷酸序列，并使每条链中特定的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 结果：形成黏性末端或者平末端。如EcoR I限制性核酸内切酶切割形成黏性末端，SmaI限制性核酸内切酶切割形成平末端。 2．DNA连接酶——DNA分子缝合针 来源：来自大肠杆菌的E·coli DNA连接酶和来自T4噬菌体的T4DNA连接酶。 作用：连接具有相同黏性末端或者平末端的两段双链DNA分子，形成两个磷酸二酯键。E·coli DNA连接酶只能连接黏性末端，T4DNA连接酶可以连接两种末端。 3．载体——DNA分子运输车 载体种类：质粒、动植物病毒及λ噬菌体的衍生物。 载体必须具备三个特点：有一个至多个限制性核酸内切酶切点；能够在宿主细胞中稳定存在并能自我复制；有特殊的标记基因。天然的质粒通常都需要通过改造(如添加标记基因)才能成为合格载体。 二、基因工程的四个步骤 1．目的基因的获取：目的基因有三个来源，即基因组文库、cDNA文库和人工合成。 基因组文库的目的基因跟原有生物基因相同，是完整的基因，包括非编码区和编码区，若是真核生物，还有内含子； cDNA文库中目的基因只相当于原有生物部分基因的编码区(外显子)部分； 人工合成的目的基因分子量较小，只相当于原有生物基因的编码区(外显子)部分，但序列有多种类型。 2．基因表达载体的构建：这是基因工程的核心步骤。 (1)基因表达载体的组成： ①启动子：是RNA聚合酶识别和结合的位点，启动目的基因转录出mRNA的过程，不同宿主细胞中启动子可能有所差别。 ②目的基因：插入点位于启动子和终止子之间。 ③终止子：终止目的基因的转录。 ④标记基因：用于鉴别目的基因是否导入受体细胞，筛选已经导入目的基因的受体细胞。 ⑤复制原点：载体在宿主细胞内复制的起点。经过大量复制，形成了大量的基因表达载体。 (2)构建基因表达载体的步骤如下图： 3．目的基因导入受体细胞 Ca2＋处理大肠杆菌→基因表达载体与感受态细胞混合→感受态细胞吸收DNA分子 基因表达载体提纯→显微仪注射入受精卵→受精卵发育成转基因个体 目的基因插入Ti质粒→导入农杆菌→感染植物细胞→表达 导入过程 感受态细胞法 显微注射法 农杆菌转化法(或花粉管通道法和基因枪法) 导入方法 主要是大肠杆菌 只能是受精卵 体细胞或受精卵 受体细胞 微生物 动物 植物 导入生物 4.目的基因的检测与鉴定 呈现相应性状 个体水平检测(观察个体性状、病原体感染等) 是否表达相应性状 出现(抗原—抗体)杂交带 抗原—抗体杂交(加入相应抗体) 是否翻译蛋白质　 出现(DNA—RNA)杂交带 DNA分子杂交 是否转录 出现杂交带 DNA分子杂交 能在选择培养基生存 标记基因表达 检测是否表达 能在选择培养基生存 标记基因(如抗性基因)表达 筛选导入细胞 现象 方法 目的　　 【例1】 生物学家通过基因工程培育出了能够通过乳房生物反应器生产人的血清蛋白的牛。 (1)“分子手术刀”______________________。 (2)“分子缝合针”______________。 (3)“分子运输车”____________________________。 (4)操作步骤：从人的______________获取目的基因；目的基因与________结合构建基因表达载体；在基因表达载体中还应插入__________和终止子。然后把基因表达载体导入牛的__________，通过发育形成的牛体细胞含人的______________，成熟的牛产的奶中含有______________，证明基因操作成功。 【解析】人的血清蛋白基因可以从基因组文库(或cDNA文库)中提取，不宜从人体细胞中直接提取； 提取的目的基因先要构建基因表达载体才能导入牛的受精卵，只有受精卵才能够发育成一个完整个体，体细胞则不能，因此转基因动物的受体细胞只能是受精卵； 由该受精卵发育的个体每个细胞都含有目的基因，且目的基因在乳腺细胞中表达，因此牛奶中含有血清蛋白。 【答案】生物学家通过基因工程培育出了能够通过乳房生物反应器生产人的血清蛋白的牛。 (1)“分子手术刀”__________________________。 (2)“分子缝合针”______________。 (3)“分子运输车”________