1.2基因工程的基本操作步骤.ppt

基因文库的构建模式图 三、目的基因导入受体细胞 1、导入植物细胞常用的方法是什么？具 体过程是怎样的？ 2、导入动物细胞常用的方法是什么？基本操作程序是怎样的？ 3、导入大肠杆菌的方法是怎样的？钙离子有什么作用？ 1、导入到植物细胞常用的方法有农杆菌感染法（双子叶植物和祼子植物）、基因枪法（单子叶植物）和花粉通道法 2、导入到动物细胞常用的方法是显微注射法（先提纯目的基因，再体外注射入卵细胞或受精卵中，最后将含目的基因的受精卵移植到输卵管或子宫中发育成新个体。 3、导入到大肠杆菌（原因？）时先用Ca2+处理成感受态后与溶有载体DNA的缓冲液混合,吸收DNA分子,完成转化 四、目的基因的检测与鉴定 导入目的基因后需要检测哪些方面？各采取什么方法？ 什么是DNA分子探针？检测时的DNA探针通过什么原理来检测目的基因和相应的mRNA？ 利用抗体－抗原杂交检测的原理是什么？ 四、目的基因的检测与鉴定 植物花粉在柱头上萌发后，花粉管要穿过花柱直通胚囊。花粉管通道法就是在植物受粉后，花粉形成的花粉管还未愈合前，剪去柱头，然后，滴加DNA（含目的基因），使目的基因借助花粉管通道进入受体细胞。 2、将目的基因导入动物细胞 显微注射技术 * 2 基因工程的基本操作程序 善假于物也 提取目的基因， 目的基因与运载体结合， 将目的基因导入受体细胞， 目的基因的表达和检测 获取目的基因的方法： 1、从基因文库中获取目的基因 2、利用PCR技术扩增目的基因 概念：基因文库 （gene library） 基因组文库 部分基因文库（如cDNA文库） 基因组文库与部分基因文库的关系 寻根问底—— （1）为什么要构建基因文库？直接从含有目的基因的生物体内提取不行吗？ 提示：构建基因文库是获取目的基因的方法之一，并不是惟一的方式。如果所需要的目的基因序列已知，就可以通过PCR方式从含有该基因的生物的DNA中，直接获得，也可以通过反转录，用PCR方式从mRNA中获得，不一定要构建基因文库。但如果所需要的目的基因的序列完全不知，或只知道目的基因序列的一段，或想从一种生物体内获得许多基因，或者想知道这种生物与另一种生物之间有多少基因不同，或者想知道一种生物在个体发育的不同阶段表达的基因有什么不同，或者想得到一种生物的全基因组序列，往往就需要构建基因文库。 （2）基因文库如何构建？ 将某种生物体内的DNA全部提取出来，选用适当的限制酶， 将DNA切成一定范围大小的DNA片段，然后，将这些DNA 片段分别与载体连接起来，导入受体菌的群体中储存，每个 受体菌都含有了一段不同的DNA片段。也就是说，这个群体 包含了这种生物的所有基因，叫做这种生物的基因组文库。 如果用某种生物发育的某个时期的mRNA 反转录产生的 多种互补DNA（也叫cDNA）片段，与载体连接后储存在一个 受体菌群中，那么，这个受体菌群体就叫做这种生物的cDNA 文库。 两种基因文库的主要区别如下表所示： 通过对 受体菌 的培养而 储存基因 DUCK179制作 （3）如何从基因文库中得到所需要的基因？ 依据：目的基因的有关信息。 如：根据基因的核苷酸序列 基因的功能基因在染色体上的位置 基因的转录产物mRNA 基因翻译产物蛋白质 等特性。 2、利用PCR技术扩增目的基因 PCR技术原理 及反应过程 原理： DNA双链复制 反应过程： 1、加热至90～95 ℃ 目的基因DNA解链 2、冷却至55～60 ℃， 引物结合到互补DNA链 3、加热至70～75 ℃， 热稳定DNA聚合酶从 从引物起始互补链的 合成 利用PCR技术扩增目的基因 ① 概念：PCR全称为_______________，是一项 在生物____复制___________的核酸合成技术 ③条件：_______________________、 _______________、___________ (做启动子)、 ___________.前提条件： ②原理：__________ ④方式：以_____方式扩增，即____（n为扩增循 环的次数） ⑤结果： 选修1 P60 聚合酶链式反应 体外 特定DNA片段 DNA复制 已知基因的核苷酸序列 四种脱氧核苷酸 一对引物 DNA聚合酶 指数 2n 使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增 (二)利用PCR技术扩增目的基因 DUCK179制作 1.用一定的_________切割 质粒，使其出现一个切 口，露出____________。 2.用_____________切断目 的基因，使其产