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我们可以做得更好 ---临床实验室的PCR诊断 倪翼 罗氏分子诊断部 罗氏诊断（上海）有限公司 罗氏诊断与PCR Kary Mullis博士发明了PCR技术 1983 PCR技术在美国获得了专利批准，为Cetus公司所有 1987 Hoffmann-La Roche公司从Cetus公司获得全球PCR专利权 1991 Kary Mullis因发明PCR技术而获得诺贝尔化学奖 1993 Roche诊断成功推出HIV、HCV、HBV、TB、CT/NG等一系列基因检测试剂盒，获得FDA认证 1996 Roche集团巨资并购德国宝灵曼公司，Roche诊断成为全球最大的诊断产品供应商 1998 Roche诊断分子生化部推出全自动荧光定量PCR系统LightCycler 1998 TaqMan技术和杂交探针技术获准通过专利注册 2000 Roche诊断公司在美国获得了实时荧光定量PCR的专利权 2001 PCR在常规临床诊断的重要进展 仅作为基础研究工具 1985 实验室自制的检测试剂 1988 需要较高的分子生物学技术 时有污染发生 重复性不高 第一个商品化试剂盒 1992 PCR成为常规的临床诊断方法 1995 扩增和检测实现了自动化 多元扩增 未来的常规PCR诊断 定性检测→→实时定量检测 手工样本核酸制备→→自动化样本核酸制备 独立的样本制备和检测→→一体化检测流程 非标准化试剂→→标准化试剂 PCR一体化系统Embrace the future 核酸分离纯化→配制反应体系→加样→ → 内容概要 I：PCR一体化系统——迎接未来定性检测→→实时定量检测 手工样本核酸制备→→自动化样本核酸制备独立的样本制备和检测→→一体化检测流程非标准化检测→→标准化检测 II：PCR一体化系统——优越的性能速度 灵活性安全稳定性 定性检测→→实时定量检测 手工样本核酸制备→→自动化样本核酸制备独立的样本制备和检测→→一体化检测流程非标准化检测→→标准化检测 定性检测→→实时定量检测 实时荧光定量PCR系统-LightCycler 来自罗氏诊断的实时荧光定量PCR系统，帮助您实现 最快速、 最灵活的 临床实验室PCR检测 LightCycler毛细反应管 玻璃管壁，导热快 表面积/体积比高，反应体系小（20ul），管内外平衡快速 反应管为圆柱形，底部为一凸透镜，光学性质极佳 LightCycler结构示意图 LightCycler-PCR领域最聪明的革新 速度 20分钟完成30-40个PCR循环 实时在线监测 收集每一循环的数据并立即显示 三个荧光通道 支持内标、内对照或多重PCR 最节省 反应体积可降低至10ul 功能 定量（绝对定量、相对定量） 基因突变分析（SNP）、基因分型 灵活性 支持最多荧光检测模式（水解探针、杂交 探针及SYBRGreenI） 配套试剂 已有近百种高品质专用试剂，并且仍在不断增加 MagNA Pure LC－实现核酸的全自动提纯 来自用户的评价: “非常聪明Very clever idea, very clever” “正是我想要的That’s what we will need. We’ll have it in our next year budget.” “优雅、简洁、稳定的自动化系统Elegant, compact, robust, walk-away possible” “令人惊奇的精确性Very precise, really exciting” 磁珠法核酸分离纯化原理e.g. DNA MagNA Pure LC内部工作平面图 MagNA Pure LC操作界面：启动信息 MagNAPureLC操作界面：运行状态 MagNA Pure LC洗脱和后洗脱单元 MagNA Pure LC加样预冷模块组合 MagNA Pure LC加样预冷模块组合 MagNA Pure LC操作界面：结果 所有的样本信息可以很方便地传送至LightCycler 一体化检测流程 MagNA Pure LC 试剂盒 MagNA Pure LC Total Nucleic Acid Isolation Kit (for Blood, Serum Plasma) MagNA Pure LC DNA Isolation Kit (for blood cells) MagNA Pure LC RNA Isolation Kit I(for blood blood cells) MagN