干细胞生物学博2014.pptVIP

如何使特定个体的体细胞变为ES细胞： 1．治疗性克隆（therapeutic cloning）：用成人细胞核取代卵细胞核，在体外培养至囊胚期，然后从囊胚的内细胞层获得ESC，但不再植入子宫，即不会发育成胚胎； 2．组织移植：用动物卵细胞作为人细胞核受体，培育后获得ESC； 3 ．细胞杂交：融合人细胞核与ESC胞质。 2．理论上的不确定性 * 人ESC能否被强制定向分化； * 能否让培养中的所有ESC均按人们意愿同步分化； * ESC的中间细胞类型，如何界定、检测（特征性表面标志）和分离； * ESC分化的微环境，触发和控制细胞分化的条件和确切机制； * 通过体外扩增以获得足量细胞时，如何保留ESC自我维持而不分化的特点； 干细胞与癌症发生 * 某些干细胞可能是癌症之源：致癌基因突变的积累是癌症发生的必要条件，干细胞具有近乎无限的自我更新能力，成为积累基因突变的主要细胞。 * 造血干细胞和大脑干细胞具有白血病细胞、脑肿瘤细胞相似的某些表面特征。 * 从脑肿瘤中分离出某些类似脑干细胞（同时具有癌细胞特征）的细胞；这些变异的干细胞可在培养皿中转化为类似原发肿瘤的组织 * 迄今抗癌疗法效果欠佳，其原因可能是：放疗与化疗仅杀死快速分裂的肿瘤细胞，但未能消灭数量较少、生长缓慢的癌症干细胞。 4. ES细胞作为移植细胞源的组织相容性 对策： * 建立ESC库，提供覆盖主要HLA型别的ESC * 对ESC的MHC进行遗传学修饰（如knock-out），建立普遍适用的“万能”供者细胞系（donor line）； * 借助同源重组技术，将受者MHC导入ESC； * 直接将受者MHC转入ESC。 5．伦理学障碍 * 人的胚胎是否享有人的权利？ * 将胚胎细胞用于科研和临床是否符合道德？ 医学伦理原则： 自主、无害、有利、公平 （二）HSC生物学特征 * 造血干细胞(hemopoietic stem cell，HSC)： 具有高度自我更新能力和多能分化潜能的造血前体细胞。 来源：人胚胎期卵黄囊（第2周）、胚肝（第4周）、骨髓（5个月）；出生后骨髓为HSC主要来源； 成年人HSC分布：红骨髓（为主，比例为1/104）、脾脏（1/105）、淋巴结、外周血（0.2/105）脐带血（1/105）。 造血微环境：造血干细胞分化发育的必要条件： * 激素、细胞因子 骨髓基质细胞分泌的IL-7：B细胞分化和成熟的关键细胞因子； 集落刺激因子：可刺激不同谱系、不同发育阶段细胞的生长和分化； * 骨髓基质细胞表面黏附分子与细胞外基质相互作用 为干细胞及其分化的血细胞提供必要刺激信号； * 骨髓基质细胞表达MHC-I类和II类分子 参与HSC的阳性选择和阴性选择。 1．自我更新（self-renewal） 造血干细胞 ?不对称有丝分裂 ?子代细胞1（早期祖细胞）：继续分化 子代细胞2（自我更新）： （维持造血干细胞的全部生物学特征： 维持干细胞池大小、干细胞数量/质量不变。） 2．多向分化 * 造血干细胞?早期祖细胞 ?对称性有丝分裂?多向分化 3．静止性 * HSC具有巨大的功能储备，多数HSC处于静止状态，在机体必需时进入细胞周期。 4．不均一性（异质性） 5．表面标志 * CD34+、CD38－、HLA-DR－、CD45RA－、c-kit（干细胞生长因子受体）、CD71－等。 （1） HSC移植的类型 1）骨髓（HSC）移植 2）外周HSC移植 化疗+细胞因子（如CSF） ?动员骨髓HSC至外周血 ?获得足够数量HSC和祖细胞 ?用于移植。 3）脐血SC移植 * 脐血中含有较高比例HSC和祖细胞（CD34+细胞与骨髓接近，为成人外周血10倍），移植后重建造血持久； * 脐血HSC更原始，端粒较长，死亡受体表达低；体内生命力强； * 脐血细胞HLA表达低(对供、受者HLA相符的要求相对较低)；T细胞较原始，GVHD较低； * 含一定量基质细胞，提供造血细胞生长的微环境 ； *脐血中NK细胞和LAK细胞相对较多，有利于移植物抗白血病反应(GV