空白标准葡萄糖浓度梯度还原糖.ppt

总糖和还原糖的测定 ——3,5二硝基水杨酸(DNS)法 目的与要求 了解3,5二硝基水杨酸比色法测定糖的原理 掌握还原糖及总糖测定的操作方法 葡萄糖分子结构中有多个不对称碳原子，具有旋光性，为右旋体。一定条件下的旋光度是旋光性物质的特性常数，测定葡萄糖的比旋度，可以鉴别物质。 旋光度（α）与溶液的浓度（c）和偏振光透过溶液的厚度（L）成正比。当偏振光通过厚1dm且每1ml中含有旋光性物质1g的溶液，使用光线波长为钠光D线(589.3nm)，测定温度为t℃时，测得的旋光度称为该物质的比旋度，[α]Dt=α/Lc。 自动旋光仪 比重法快速测定葡萄糖注射液含量--《黑龙江医药科学》1990年01期 （1）斐林(Fehling)试剂热滴定定糖法： 斐林溶液与还原糖共沸，生成氧化亚铜沉淀的反应。 以次甲基蓝为指示液，以样品或经水解后的样品滴定煮沸的斐林氏溶液，达到终点时（稍微过量的还原糖将蓝色的次甲基蓝还原为无色时为反应终点），根据样品消耗量求得总糖或还原糖的含量。该法适用于测定所有食品中的糖含量。 配制方法：　将36.4g CuSO4.5H2O溶于200mL水中，用0.5mL浓硫酸酸化，再用水稀释到500mL待用； 取173g酒石酸钾钠KNaC4H4O6.4H2O，71g NaOH固体溶于400mL水中，再稀释到500mL． 使用时取等体积两溶液混合． （2）蒽酮比色法： 糖类遇浓硫酸脱水生成糠醛或其衍生物，该衍生物与蒽酮发生反应，反应后溶液呈蓝绿色，在620nm处有最大吸收。该法多用于测定糖原的含量，也可用于测定葡萄糖的含量。 （3）碱性铜试剂法 在碱性溶液中，二价铜离子被还原糖还原成一价的氧化亚铜，氧化亚铜在酸性环境中与一定量的过量碘起反应，再用标准硫代硫酸钠滴定剩余的碘，即可算出还原糖的含量。该法适用于测定植物材料中的还原糖及发酵液中总糖及还原糖。 （4）3，5一二硝基水杨酸比色定糖法 该法是半微量定糖法，操作简便、快速，杂质干扰较少，是糖定量测定的一种基本方法。 利用单糖、双糖与多糖的溶解度不同可使它们分离开，并且可用酸水解或酶水解法使没有还原性的多糖彻底水解成具有还原性的单糖，再进行测定。 原理 还原糖：含游离的醛基(-CHO)和羰基(-C=O)的单糖和某些具有还原性的双糖。 还原糖在碱性条件下可变成非常活泼的烯二醇，此物质遇到氧化剂时可被氧化成糖酸及其它物质。 如在NaOH和丙三醇存在下，3,5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈棕红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。 非还原性的双糖和多糖，可用酸水解法彻底水解成单糖，进行定量测定。 若样品中多糖含量远大于单糖含量时，则比色测定所得的总糖含量应去除水量，即乘以折算系数(1－18/180)=0.9。 试剂和材料 一、试剂 3,5－二硝基水杨酸（DNS）试剂 葡萄糖标准溶液 6M HCl 碘－碘化钾溶液 6M NaOH 0.1% 酚酞指示剂。 二、材料：面粉 2、样品中总糖的提取 （1） 精确称取1克左右的面粉，放入三角烧瓶中， 先加15ml蒸馏水，再加入10ml 6M HCl，搅匀后置沸水浴水解30分钟。 （2）用玻棒取一滴水解液于白瓷板上，加一滴I2-KI溶液，检查淀粉水解程度，若水解完全，则不显蓝色。 （3）取出沸水浴中的三角瓶，冷却后，加一滴酚酞指示剂，用6M NaOH滴加至微红色。 （4）将溶液转移至100ml容量瓶（B1）中，定容、混匀，用漏斗过滤（滤纸不能用蒸馏水湿润）。 （5）精确吸取10ml滤液，移入另一个100ml容量瓶（B2）中，用蒸馏水定容、混匀后作为总糖待测液备用。 结果与计算 见教材 思考题 比色时为什么要设计空白管？ 在样品总糖提取时，为什么要用浓HCl处理？而测定前，又为何要用NaOH中和呢？ * * 糖类定量测定常见的方法 糖类的测定方法有物理方法和化学方法两类。物理法是通过糖的折光率、比旋度的变化、比重计进行测定。化学测定法主要是还原糖的还原性质，与试剂（氧化剂）反应。化学方法比较精确，常常用于还原糖和总糖的测定。常用的化学测定方法有以下几种： 手持式折光率仪/糖度计(RA-130,日本) 光从介质1射入介质2发生折射时，入射角θ1与折射角θ2的正弦之比n21叫做介质2相对介质1的折射率（折光率），即“相对折射率”。 * 实验步骤 一、样品中还原糖和总糖的提取 1、样品中还原糖的提取 （1） 精确称取3克左右面粉，放入100ml小烧杯中，用量筒取50ml蒸馏水，先在烧杯中倒入少量蒸馏水，将