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南昌大学组织与细胞化学考试答案 （适用于范丽华班） 一、名词解释 1、异染现象：染料离子以某种方式使它对所吸收的波长有所改变，因而观察到被染的组织显示与该染料本身颜色不一样，此现象为异染现象。 2、诱发荧光：组织细胞中的某些物质本身不发荧光， 但在经过一定的化学反应后可以转变成荧光分子。 自发荧光：组织细胞中的一些物质自发产生的荧光。 原位杂交组织化学：是应用已知碱基顺序并带有标记物的核酸按碱基配对的原则进行特异性结合，形成杂交体，然后再应用与标记物相应的检测系统通过组织化学或免疫组织化学在核酸原有的位置进行细胞内定位。 4、荧光免疫组织化学: 免疫荧光组织化学是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光素，再用这种荧光抗体(或抗原)作为探针检查细胞或组织内的相应抗原(或抗体)的一门技术。 5、点计数：计数落于所测图像内（轮廓面）内的测数点。 交叉点计数：计数测线与所测图像的周界线之间形成的交叉点的数目。 6、DAB系统：一种常用的显色系统。是过氧化物酶的生色底物，在过氧化氢的存在下失去电子而呈现出颜色变化和积累，形成棕褐色不溶性产物。用于检测过氧化物酶的活性，灵敏度高，特异性好。其适用于蛋白质杂交和免疫化学，以及原位杂交染色等。产品即到即用，性能稳定，操作便捷，敏感度高，显色清晰，重复性好。在体外的细胞培养中，单个的或数量很少的细胞不易生存与繁殖，必须加入其它活的细胞才能使其生长繁殖，加入的细胞称之为饲养细胞(Feeder cell)。Phosphatidylserine(PS) 正常位于细胞膜的内侧，在凋亡早期从细胞膜的内侧翻转到膜表面 Annexin-V： Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力特异性结合。将Annexin-V进行荧光素（FITC、R-PE）标记后作为探针，利用流式细胞仪、荧光显微镜以及共聚焦激光扫描显微镜检测细胞凋亡的发生。 Annexin V是一种Ca2+依赖的磷脂结合蛋白，在Ca2+存在的情况下，与磷脂酰丝氨酸有很高的亲和力，因此Annexin V是检测细胞早期凋亡的灵敏指标。 细胞凋亡与坏死的最大区别为前者的细胞膜保持完整，而后者的细胞膜破碎。PI（碘化丙啶）作为一种可嵌入DNA双链的红色荧光物质，不能通过完整的细胞膜，因此对活细胞和早期凋亡的细胞不能染色，但可进入坏死细胞（包括晚期凋亡细胞），使其发出红色，因此通过荧光素标记的Annexin V和PI对细胞进行双染色，可将早期凋亡细胞，活细胞和坏死细胞区分开来。 3、线粒体膜势能的检测 线粒体荧光染料：Rhodamine 123、DiOC6（3）、JC-1、TMRM等对线粒体膜电位非常敏感，其荧光的增强或减弱说明线粒体内膜电负性的增高或降低。 4、DNA片段化分析 细胞凋亡时染色质DNA在核小体单位之间的连接处断裂, 形成180?200bp整数倍的寡核苷酸片段, 在凝胶电泳上表现为梯形电泳图谱(DNA ladder)。 5、TUNEL法 6、Caspase活性检测 7、凋亡相关蛋白TFAR19蛋白的表达和细胞定位分析 凋亡早期TFAR19表达↑并出现快速核转位现象，伴随着细胞核形态学的变化，持续较长时间，在凋亡小体中仍然可见。 利用荧光素（FITC）标记的TFAR19单克隆抗体为探针进行TFAR19蛋白的细胞定位分析。 凋亡的生理学意义: 1、胚胎发育期去除某些细胞 2、维持内环境稳定 增殖细胞群中细胞去除、去除潜在有害的自身反应性淋巴细胞 3、参与防御反应 细胞毒T细胞 细胞凋亡在疾病防治中的意义 ㈠ 合理利用凋亡相关因素 1. 诱导靶细胞凋亡 放疗、化疗（抑制Bcl-2抗凋亡作用 促进促凋亡基因作用 增强P53促凋亡作用） 高热、高温 2.减少细胞凋亡 ：NGF、促生长因子、抗氧化剂 ㈡ 干预凋亡信号转导 ㈢ 调节凋亡相关基因 ㈣ 控制凋亡相关酶学机制 ㈤ 防止线粒体跨膜电位的下降 5、形态学定量研究方法 显微分光光度计的应用、流式细胞计的应用、图像分析技术（体式学技术） （1）用平行单色光透射样品（切片、涂片），通过测定被吸收光的峰值来检测某成分的含量，如核酸、某些燃料、某些酶组化反应物等，通过显微分光光度计可检测器含量。 （2）流式细胞计是对细胞进行自动分析和分选的装置。它可以快速存储、显示悬浮在液体中的分散细胞的一系列重要的生物物理、生物化学方面的特征参量，并可以根据预选的参量范围把指定的细胞亚群分选出来。 （3）图像分析技术包括自动图像分析仪和人工图像分析仪。 6、体式学技术的基本方法 体式学定量研究的基本步骤有三步：获取要测量的组织图像；在图像上叠加或叠映测格，然后进行点技术等测试；将测试结果代入相应公式，经简单的数学运算后得出估计结果。