大鼠视上核和室旁核神经元钾离子氯离子共转运体2表达研讨.pdf

大鼠视上核和室旁核神经元钾离子氯离子共转运体2 表达研讨 作者：王德广，张静，陈菲菲，郑殿杰，陈幽婷 【摘要】目的观察神经元特异性标记物钾离子氯离子共转运体2 在成年大鼠 下丘脑视上核和室旁核的表达。方法 成年SD 大鼠，4％多聚甲醛灌注固定，取 脑，冰冻切片，下丘脑部进行钾离子氯离子共转运体2 和神经细胞核抗原免疫 荧光染色，激光共聚焦显微镜观察。结果 钾离子氯离子共转运体2 在视上核和 室旁核神经元中表达很弱。结论 下丘脑视上核和室旁核部分神经元缺少神经特 异性的钾离子氯离子共转运体2 表达。 【关键词】下丘脑；视上核；室旁核；钾离子氯离子共转运体2 Abstract: Objective To observe the neuronal specific expression of potassium chloride ion cotransporter 2 in adult rat supraoptic and paraventricular nuclei. Methods The adult SD rats were sacrificed and fixed with 4% paraformaldehyde to remove the brain for frozen- sectioning. The expression of potassium chloride ion cotransporter 2 and NeuN revealed by immunofluorescence were studied in the photos taken under laser confocal microscope. Results The expression of potassium chloride ion cotransporter 2 was absent from the supraoptic and paraventricular nuclei. Conclusion The neuronal specific potassium chloride ion cotransporter 2 is absent in the supraoptic and paraventricular nuclei. Key words: hypothalamus; supraoptic nucleus； paraventricular nucleus； potassium chloride ion cotransporter 2 钾离子氯离子共转运体2 （potassium chloride ion cotransporter 2， KCC2）是成年哺乳动物脑内神经元特异性表达的膜蛋白［1- 2］，其对成熟神 经元胞内的氯离子外排作用是维持成熟神经元胞内低氯离子浓度的重要因素， 而神经元胞内低氯离子浓度的维持是抑制性神经递质γ -氨基丁酸（γ - aminobutyric acid，GABA）离子型受体发挥抑制性作用的前提［3-4］。我们 以前的研究表明，成年哺乳动物脑内的缰内侧核缺少KCC2 蛋白的表达，同时缺 少GABA 的A 型（GABAA）受体信号系统介导的抑制性作用［5］。 正常脑功能的维持需要保持脑内兴奋性和抑制性神经元活动的稳态平衡 ［6］，GABAA 受体介导的抑制作用是中枢神经系统内主要的抑制性信号系统。 下丘脑的视上核和室旁核的神经元既具有神经元的特点，也具有分泌神经递质 这一不同于神经元的特点，他们分泌的催产素和加压素对调节生殖器官活动和 水电介质平衡等起到重要作用。本研究使用免疫荧光双标并结合激光共聚焦显 微镜成像技术检测神经元特异性的KCC2 在下丘脑视上核和室旁核中的表达。 1 材料和方法 1.1 实验动物和切片制备 雄性SD 大鼠，体重230～250 g （徐州医学院实验动物中心提供）。动物 用0.4%戊巴比妥钠麻醉（60 mg/kg），开胸，经升主动脉向心插管，先灌注 100 ml 生理盐水，随后以4%冷多聚甲醛（0.1 mol/L 磷酸缓冲液配制，pH 7.4） 灌流固定，取整脑后固定6 h，15%和30%蔗糖溶液各浸泡12 h，30 μ m 冰冻切 片，收取含视上核和室旁核的切片置于0.01 mol/L 磷酸盐缓冲液中（pH 7.4）。 1.2 免疫荧光化学反应 参照文献［5］方法。主要步骤为： 冰冻切片使用5%的正常羊血清室温孵 育30 min；第一抗体为兔抗K