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第二章 DNA的复制 分子生物学 第一节 DNA复制的基本特点 一、DNA复制的半保留性 在DNA复制时，亲代DNA的双螺旋先行解旋分开，然后以每条链为模板，按碱基互补配对原则，在这两条链上各形成一条互补链，这样从亲代DNA的分子可以精确地复制成2个子代DNA分子，每个子代DNA的一条链来自亲代DNA，另一条链则是新合成的。这种复制方式称为半保留复制(semiconservation replication)。 二、复制过程的顺序性 双螺旋DNA是先全部解开成两股单链，然后分别作为模板合成新链，还是边解开边合成的？ 三、DNA的半不连续复制 四、复制起点和复制子 复制起点(Origin of replication) ：DNA复制在生物细胞中要从DNA分子上特定位置开始，这个特定的位置就称为复制起点，用ori表示。原核DNA较小，每一分子只有一个复制原点，而真核DNA则有多个复制原点。 复制子(replicon)：DNA复制从起点开始双向进行直到终点为止，每一个这样的DNA单位称为复制子，主要包括复制起始位点和终止位点。 第二节 DNA复制所需的酶和其它蛋白质 DNA复制实际上就是DNA指导的DNA合成代谢，以DNA作为复制的模板，脱氧核苷三磷酸(dATP，dGTP，dCTP，dTTP)是合成原料。除此外，细胞内还有许多酶和蛋白质参与DNA的复制。 一、拓扑异构酶 (旋转酶) 二、解螺旋酶（解链酶） 三、单链结合蛋白（SSB） 四、RNA聚合酶（引物酶） 五、DNA聚合酶 六、DNA连接酶 一、DNA拓扑异构酶(DNA Topisomerase) 二、解螺旋酶(Helicase) 大肠杆菌中发现有两种螺旋酶参与这个过程，一种称为螺旋酶Ⅱ或螺旋酶Ⅲ，与滞后链的模板DNA结合沿5→3方向运动；第二种称为Rep蛋白，和前导链的模板DNA结合沿3→5方向运动。 三、单链DNA结合蛋白(SSBP) 解螺旋酶沿复制叉方向向前推进产生了一段单链区，但是这种单链DNA不会长久存在，会很快重新配对形成双链DNA或被核酸酶降解。在细胞内有大量单链DNA结合蛋白(single strand DNA binding protein SSBP)能很快地和单链DNA结合，防止其重新配对形成双链DNA或被核酸酶降解。 四、引发酶(Primase) 引发酶催化引物RNA分子的合成，为DNA复制提供RNA引物。 引发酶活性较低，只有在其它蛋白质的存在下才显示较高活性。引发酶与其它蛋白质所形成的复合体称为引发体（primosome）。引发体在后随链的模板上移动到一定位置便可以引发RNA引物的合成。 它和传统的RNA聚合酶不一样，主要表现在： [1] 引发酶对利福平不敏感，而RNA聚合酶则敏感； [2] 引发酶既可以利用核糖核苷酸，也可以利用脱氧核糖核苷酸，而RNA聚合酶只能利用核糖核苷酸； [3] 引发酶只在复制起点处合成RNA引物而引发DNA的复制，而RNA聚合酶则是启动DNA转录合成RNA从而将遗传信息由DNA传递到RNA。 五、DNA聚合酶(DNA Polymerase) 1956年由A.Kornberg首先在大肠杆菌中发现DNA聚合酶，又称Kornberg酶。以后随着研究的深入，人们又发现了另外两种DNA聚合酶，为了区别，人们把Kornberg酶称为DNA聚合酶Ⅰ，另两种分别称为DNA聚合酶II和DNA聚合酶III。 DNA聚合酶的主要特性和功能介绍如下： 1、DNA聚合酶Ⅰ(DNApolymeraseⅠ，DNApolⅠ) DNApolⅠ经过枯草杆菌蛋白酶处理后，酶分子分裂成两个片段，较大的C-端片段分子量为76KD，通常称为Klenow片段，具有5→3聚合作用和3→5外切酶活性；较小的N-端片段分子量为34KD具有5→3外切酶活性。 DNApolⅠ功能： a 5→3聚合作用：DNApolⅠ的聚合作用主要用于DNA的修复和RNA引物的替换。 b 5‘→3’外切酶活性： 冈崎片段5末端RNA引物的去除依赖此种外切酶活性。 d 焦磷酸解作用： 无机焦磷酸分解DNA生长链，可以认为是DNA聚合作用的逆反应，而且这种水解DNA链作用需要有模板DNA的存在。(dNMP)n+XPPi←(dNMP)n-x+X(dNPPP) e 焦磷酸交换作用： 催化dNTP末端的PPi同无机焦磷酸的交换反应。 最后两种作用，都要求有较高浓度的PPi，因此，在生物体内由于没有足够高的PPi而