神经系统动物模型1.ppt

110- 3.剪去头顶被毛，皮肤消毒，在前囱附近做一长约2cm的纵行切口，暴露颅骨,用30%过氧化氢腐蚀颅骨上腱膜及颅骨外膜，暴露前囱。 4.于前囱前1mm、中线右旁3mm处取点，用牙科钻钻一直径约1mm的圆孔，穿透颅骨。在脑立体定位仪垂直位固定一微量注射器，使针头与颅骨钻孔的方向在一条直线。固定好脑立体定位仪，取下微量注射器。 5.将大鼠双下肢翻转朝上固定，暴露尾根部腹侧，消毒后在距尾根1.5cm腹侧正中做一长约1cm纵行切口，游离尾动脉0.5cm。在其下面垫一“V”形小塑料片或手术刀柄。用生理盐水冲洗过的微量注射器穿刺尾动脉，抽取60~70μl血液。 或从一侧已暴露并分离的股动脉取血,或剪尾巴尖取血. 6.迅速将微量注射器针头通过颅骨钻孔垂直缓慢进入脑内，深6mm，缓慢匀速向脑尾状核注血50μl，注血持续时间2min，注血后留针10min再缓慢退针，用骨蜡封闭骨孔。取血、注血整个过程在3min内完成。 7.假手术组动物除不注入血液外，其他操作同模型组。 8.缝合头皮切口，加压包扎尾部切口。待大鼠苏醒后送回动物室饲养。 [观察指标] 1.神经功能评分 术后每天进行神经功能评分1次（右侧尾状核注血） 。 (1)Longa评分法： 0分，无神经功能缺陷 1分，左侧前爪不能完全伸展 2分，行走时向左侧转圈 3分，行走时向左侧倾倒 4分，不能自动行走，有意识丧失 (2)Bederson评分法：轻抓鼠尾，使动物高于桌面10cm，正常大鼠前爪伸直。 0分，无神经功能缺陷 1分，将尾提起，瘫痪侧(血肿对侧)前肢回收、屈曲于腹下，正常侧前肢向桌面伸展 2分，除1分体征外，俯卧于桌面时向瘫痪侧侧推大鼠时阻力较从对侧明显降低 3分，除1分和2分的体征外，行走时大鼠向瘫痪侧旋转。 2.取材和观察 因脑水肿高峰期为2~3 d，因此在术后3d用4%缓冲多聚甲醛液灌注固定脑组织。开颅取脑再置于相同固定液中固定1周。从后至前以1.2mm为一间隔将脑做冠状等距切片，片厚6μm，选有血肿的切片行常规HE染色后，光镜观察，并用图像分析仪测量、计算血肿体积及水肿带体积。 [结果] 1.注射自体血后，注血对侧肢体出现不同程度的瘫痪，神经功能异常的程度与病变严重程度相平行。 2.大体观察在注血处的脑冠状切面上，右侧尾状核处有一明显的血肿灶，血肿周围可见明显浅淡的模糊区。 3.光镜观察 模型组右侧尾状核区可见一较大出血区，其周围为颜色浅淡的水肿区。出血区有明显血凝块形成，其周围水肿区内组织结构破坏。 [模型评价] 1.本模型是目前应用最多的脑出血动物模型之一。大鼠尾状核是脑内最大的核团，易于定位，也是人类脑出血的多发部位。 大鼠右侧尾状核注血较常用，在脑立体定位仪其坐标各研究者报道基本一致：即正中线右3 mm，颅骨表面下6 mm，稍有出入的是前囟前的位置，分别有前囟前0.2、0.4、0.5和1mm几个位点，但均在0.2~1mm之间，个别取前囟后0.2mm。 前囟前1.0 mm显示的尾状核 2.本模型血肿周围脑水肿比较明显，但血肿体积不恒定，不同个体间差异较大。可能由于部分血液注入后溢出，脑出血症状不十分明显，神经功能评分较低，因此功能评分仅供参考。 3.大鼠的大脑容积一般为2ml左右，自体血注入50μl,相当于人类脑出血40ml。临床上如果人基底核出血量达40ml时，症状一般比较严重，多需手术治疗。 4.由于本模型应用非肝素化自体血，比较接近人类脑出血的实际情况，适合研究脑出血的自然过程和病理变化。 [注意事项] 1.注血次数有1次、2次和3次之分。由于自体血内不加入抗凝剂，离体后几分钟内即能凝固，故动脉血的采集非常关键。 [注意事项] 自体血来源有股动脉、颈动脉、心脏穿刺、剪尾取血和尾动脉穿刺等，目前应用较多的是尾动脉穿刺取血。暴露股动脉可造成局部创伤，影响下肢功能，会给动物神经功能观察带来困难。剪尾取血简便易行，成功率高，但血液成分包括动脉血、静脉血及组织液，与人类脑出血的血液内容不一致。 2.注血速度应缓慢，注血过快容易引起血液沿针孔溢出或进入侧脑室。整个取血、注血过程应在3min内完成，否则血液凝固，注血失败。注血后留针10min，待局部血液凝固后再缓慢退针，并用骨蜡封闭骨孔，防止血液从进针孔外溢。 二、注入胶原酶和肝素诱发 大鼠脑出血模型 [造模原理] 用Ⅶ型胶原酶和肝素生理盐水溶液注入脑尾状核诱发脑出血，是利用胶原酶能分解细胞间质和血管基膜的胶原蛋白，引起局部渗血，肝素使渗出的血液不凝固，增大血肿体积。 第三节 蛛网膜下腔出血动