实验十、巴氏小体的观察与染色体疾病（3学时） [课件].pptVIP

实验十、巴氏小体的观察与染色体疾病 （3学时） 一、 实验目的 掌握观察与鉴别X染色质的简易方法，识别其形态特征及所在部位，为进一步研究人体染色体的畸变与疾病提供参考条件。 二、 实验原理 1949年， Barr等人在雌猫的神经元细胞核中首次发现一种染色较深的浓缩小体，而在雄猫则没有这种结构。进一步研究发现，其他雌性哺乳动物（包括人类）也同样有这种显示性别差异的结构。而且不仅是神经元细胞，在其他细胞的间期核中也可以见到这一结构，称之为巴氏小体，也称为X染色质。 正常女性的间期细胞核中紧贴核膜内缘有一个染色较深，大小约为1微米的三角形或椭圆形小体，即X染色质。间期核内X染色质的数目总是比X染色体的数目少1。正常女性有两条X染色体，因此只有一个X染色质；若有三条X染色体，就会有两个X染色质，余此类推。正常男性只有一条X染色体，所以没有X染色质。 为什么正常男女之间的X染色质存在差异？女性两个X染色体上的每个基因座的两个等位基因所形成的产物，为什么不比只有一个X染色体半合子男性的相应基因产物多？为什么某一X连锁的突变基因纯合子女性的病情并不比半合子的男性严重？1961年，Mary Lyon 提出了X染色体失活的假说，即Lyon假说对这些问题进行了解释。其实验依据是对小鼠X连锁的毛色基因的遗传学观察。发现雌性小鼠毛色杂合体不表现显性性状，也不是中间类型，而是显性隐性两种颜色嵌合组成斑点状（不是共显性）。而雄性小鼠却从不表现斑点状毛色，而是显性或隐性单一颜色的毛色。 三、 实验材料 所用器材与药品：显微镜，灭菌玻璃片，60%冰醋酸，45%冰醋酸，改良苯酚品红。 四、实验步骤 1. 口腔颊部粘膜细胞巴氏小体观察 刮取颊部粘膜上皮细胞（用灭菌玻璃片）→涂片（两片45°角）→60%冰醋酸固定5分钟→吸去冰醋酸，用改良苯酚品红染色1-2分钟→压片→镜检 。 2. 发根细胞巴氏小体观察 拔取带毛囊头发一段→45%冰醋酸解离5分钟→剥取毛囊→染色2-3分钟→压片。 3. 观察 在女性间期细胞核内侧靠近核膜处有约1微米大小的反光极强的颗粒状亮点，即为巴氏小体。材料不同，观察结果可能有不同，且必须和核仁区别开来（核仁往往离核膜较远或接近核中央部位）。 五、作业 1．分别观察男女各50个可数细胞，计算显示X染色质所占百分比。 2．观察中选绘4-5个典型细胞，示明X染色质体的形成和部位。 正常女性口腔粘膜细胞中约30-50%有一个巴氏小体，男性则低于1-2%。 注意事项 1．刮口腔上皮前要漱口； 2．刮时用灭菌玻璃片的宽边，勿用一角，以免划破口腔； 3．第一次刮下的脱落细胞用酒精棉球擦去，在原位重复刮一下制片； 4．盛放酒精棉球的小广口瓶，瓶盖用完即时盖好； 5．涂片略干再加改良苯酚口红； 6．染色时间不要太长，否则核质着色深，X染色质体不易区分； 7．毛囊细胞要充分解离，压片前可先用解剖针敲片，使细胞解离； 8．可数细胞的标准：核质染色呈网状或颗粒状；核膜清晰，无缺损；染色适度，周围无杂质。 * *